Product Description
Concentración: ≥20 U/µL. Vida útil: 36 meses. Temperatura de almacenamiento: -20 °C sin ciclo de descongelación.
Características
- Activo en un amplio rango de temperatura (10–80 °C) y un amplio rango de pH (óptimo a pH 6,0–9,0)
- Altamente activo en concentraciones elevadas de sal y otros aditivos tampón típicos.
- Requiere cationes bivalentes (Mg 2+ y Ca 2+ ) para una actividad máxima
- Degrada el dsDNA a fragmentos de menos de 10 nt
- La actividad hacia dsDNA es al menos 1000 veces mayor que hacia ssDNA
Detalles del producto
La dsDNasa es una endonucleasa recombinante de 42,8 kDa derivada de anfípodos marinos, expresada en Pichia pastoris. Esta enzima muestra una alta actividad específica hacia el ADN bicatenario, dejando intactos el ADN o ARN monocatenario en condiciones estándar. La dsDNasa presenta una alta actividad en un amplio espectro de temperaturas, condiciones de tampón y pH.
Estas características hacen que la dsDNase sea extremadamente útil para la degradación rápida y segura del ADN genómico, donde la ausencia de ribonucleasas es fundamental para mantener la integridad del ARN.
La enzima hidroliza los enlaces fosfodiéster produciendo oligonucleótidos con grupos 5'-fosfato y 3'-hidroxilo.
Se suministra con 20 mM Tris-HCl, pH 8,0; 50 mM KCl; 5 mM MgCl 2 ; 50% (v/v) glicerol.
Una unidad se define como la cantidad de enzima que provoca un aumento de la absorbancia a 260 nm de 1,0 en 30 minutos a 37 °C y pH 8,0 con ADN de esperma de arenque como sustrato.
Actuación
Ensayo: Especificación
Pureza de la proteína: >95%
Actividad de ARNasa: No se detectó ninguna
Actividad de proteasa: No se detectó ninguna
Principio
La actividad específica es similar a la DNasa I bovina; sin embargo, la dsDNasa se caracteriza por una mayor estabilidad en condiciones de reacción y almacenamiento exigentes (por ejemplo, tampones con alto contenido de sal y detergente y temperatura elevada).
La concentración óptima de dsDNasa en la mezcla de reacción final depende de varios factores (nivel de contaminación de ácidos nucleicos, temperatura y tiempo de incubación, concentración de sal y otros compuestos presentes en la mezcla de reacción). La cantidad de dsDNasa y las condiciones de incubación deben determinarse experimentalmente (recomendamos usar 35 U de dsDNasa para la digestión de hasta 50 µg de dsDNA a 37 °C durante 10-15 minutos).
En presencia de iones Mg₂ o Ca₂, la dsDNasa muestra una alta actividad endonucleasa hacia el dsADN, dejando intactos el ssADN y el ARN. La presencia de iones Ca₂ aumenta la actividad total de la dsDNasa. En presencia de iones Mn₂, la enzima muestra una actividad dsDNasa ligeramente elevada, incluyendo la actividad hacia el ssADN y el ARN. Evite el uso de iones Mn₂ durante la purificación de ARN o ssADN.
La inactivación de la dsDNasa depende de la concentración del agente reductor, el tiempo de inactivación y la temperatura. Recomendamos inactivar la dsDNasa mediante incubación a 85 °C durante 15 minutos en presencia de agentes reductores como DTT o TCEP (1–10 mM). La enzima requiere 1–10 mM de DTT o TCEP para su inactivación completa. Como alternativa, la dsDNasa puede inactivarse y eliminarse mediante una columna de centrifugación o extracción con fenol/cloroformo.
Procedimiento
Control de calidad
La concentración de proteína se determinó mediante electroforesis SDS-PAGE utilizando el ensayo de detección con azul de Coomassie.
La presencia de actividad de ARNasa se determinó mediante electroforesis en gel después de la incubación de 1 µg de ARN eucariota total con 10 U de enzima en un volumen de 20 µL durante 1 hora a 37 °C.
La presencia de actividad de proteasa se determinó mediante SDS-PAGE con detección de Azul Coomassie luego de la incubación de 1 µg de BSA con 100 U de enzima durante 20 horas a 37°C.
Un volumen de reacción de 1,575 mL que contiene ADN de esperma de arenque como sustrato se incuba durante 30 minutos a pH 8 y 37 °C con una enzima que degrada el ADN a oligonucleótidos solubles en ácido. Una unidad de la enzima provoca un aumento de 1,0 en la absorbancia a A260.
Aplicaciones
- Extracción y purificación de ARN
- Eliminación de ADN genómico contaminante de muestras de ARN
- Degradación de la plantilla de ADN en reacciones de transcripción
- Reducción de la viscosidad en muestras biológicas
- Eliminación de ADN residual durante el aislamiento primario de células madre, procedimientos biofarmacéuticos y de bioprocesamiento
Esto se utiliza para aplicaciones como:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924