Product Description
144.000 U de ADN ligasa T4 (600.000 U/ml) y tampón de ligación rápida 5X
Características
- Tampón formulado específicamente para la ligadura del adaptador NGS
- Une eficazmente extremos romos y cohesivos.
- Repara mellas monocatenarias en ADN dúplex, ARN e híbridos ADN:ARN
Detalles del producto
La ligasa WGS está optimizada para la ligación tras la fragmentación WGS. Cataliza la formación de un enlace fosfodiéster entre el fosfato terminal 5' y un grupo hidroxilo 3' del ADN o ARN dúplex. La enzima une eficazmente extremos romos y cohesivos y repara mellas monocatenarias en ARN dúplex, ARN o híbridos ADN/ARN.
Se suministra en: 10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM ditiotreitol, 0,1 mM EDTA, 50 % glicerol, pH 7,5 a 25 °C.
Se suministra con: tampón de ligadura rápida 5x (B9020): 330 mM Tris-HCl, 50 mM MgCl2, 5 mM DTT, 5 mM ATP, 30 % PEG 6000, pH 7,6 a 25 °C
Actuación
Prueba: Especificaciones
Pureza SDS: >99%
Actividad específica: 300.000 U/mg
Exonucleasa monocatenaria: <1,0 % liberada
Exonucleasa bicatenaria: <1,0 % liberada
Endonucleasa bicatenaria: Sin conversión
Contaminación del ADN de E. coli: <10 copias
Propiedades:
Temperatura de almacenamiento: –25 °C a –15 °C Peso molecular: 55.292 Daltons
Principio
Fuente de proteína: Una cepa de E. coli recombinante que porta el gen de la ADN ligasa T4 clonado
Definición de unidad: 1 unidad se define como la cantidad de ADN ligasa necesaria para unir el 50 % de 100 ng de fragmentos de ADN con extremos cohesivos en 50 µl de tampón de ADN ligasa 1X después de una incubación de 30 minutos a 23 °C.
Procedimiento
Consulte el manual en la sección de recursos.
Análisis de control de calidad:
La actividad unitaria se mide mediante un método de dilución seriada doble. Las diluciones del lote de enzima se realizaron en tampón de reacción de ADN ligasa 1X y se añadieron a reacciones de 20 μL que contenían fragmentos de ADN bicatenario y tampón de reacción de ADN ligasa 1X. Las reacciones se incubaron durante 30 minutos a 23 °C, se detuvieron y se analizaron en un gel de agarosa al 1% teñido con bromuro de etidio.
La concentración de proteína se determina mediante la absorbancia OD 280.
La pureza física se evalúa mediante SDS-PAGE de soluciones enzimáticas concentradas y diluidas, seguida de la detección mediante tinción de plata. La pureza se evalúa comparando la masa agregada de las bandas contaminantes en la muestra concentrada con la masa de la banda de proteína de interés en la muestra diluida.
La exonucleasa monocatenaria se determina en una reacción de 50 µL que contiene un sustrato de ADN monocatenario radiomarcado y 10 µL de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.
La exonucleasa bicatenaria se determina en una reacción de 50 µl que contiene un sustrato de ADN bicatenario radiomarcado y 10 µL de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.
La endonucleasa bicatenaria se determina en una reacción de 50 µL que contiene 0,5 µg de ADN plasmídico y 10 µL de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.
La contaminación del ADNr 16S de E. coli se evalúa utilizando muestras replicadas de 5 µL de solución enzimática desnaturalizada y analizada en un ensayo qPCR TaqMan para detectar la presencia de ADN genómico de E. coli contaminante utilizando cebadores oligonucleótidos correspondientes al locus del ARNr 16S.
Aplicaciones
- Ligadura del adaptador NGS
La ligasa WGS se utiliza para aplicaciones de biología molecular como:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
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