Product Description
10.000 U de Taq-B Polimerasa (2 mL a 5000 U/mL) y Buffer PCR 10x.
Características
- ADN polimerasa 5′→3′ procesiva y térmicamente estable
- Posee una fracción de traducción de mella inherente de 5′→3′
- Se destaca en la amplificación de secuencias más cortas (<5 kb) a partir de fuentes de plantillas de baja complejidad.
- Produce rendimientos robustos con poca o ninguna optimización de las condiciones de reacción.
Detalles del producto
La ADN polimerasa Taq-B es una ADN polimerasa 5′→3′ procesiva y termoestable del organismo termófilo Thermus aquaticus YT-1. Esta proteína de 94 kDa posee una actividad exonucleasa 5′→3′ inherente y carece de función de corrección 3′→5′.
Taq se destaca por amplificar secuencias más cortas (<5 kb) a partir de fuentes de plantillas de baja complejidad y produce rendimientos robustos con poca o ninguna optimización de las condiciones de reacción.
La enzima se suministra en 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, estabilizador, 50 % glicerol pH 7,5 a 25 °C.
Se suministra con un tampón PCR 10X (B7030) que contiene: 100 mM Tris-HCl, 500 mM KCl, 15 mM MgCl 2 pH 8,3 a 25⁰C.
Actuación
Ensayo: Especificación
Pureza: >99%
Actividad específica: 74.625 U/mg
Exonucleasa monocatenaria: 50 U; funcional
Exonucleasa bicatenaria: 50 U; funcional
Endonucleasa bicatenaria: 50 U; sin conversión
Contaminación por ADN de E. coli: 50 U; <10 copias
Principio
La enzima cataliza la síntesis de ADN 5'→3', no tiene actividad exonucleasa 3'→5' (corrección) detectable y posee actividad exonucleasa 5'→3'.
Procedimiento
Las instrucciones para el uso de la ADN polimerasa Taq-B se proporcionan en el protocolo del kit correspondiente en los recursos a continuación.
Control de calidad
La actividad unitaria se midió mediante un método de dilución seriada doble. Se realizaron diluciones de la enzima en tampón de reacción 1X y se añadieron a reacciones de 50 μL que contenían ADN de timo de ternera, 25 mM de TAPS (pH 9,3), 50 mM de KCl, 2,0 mM de MgCl₂, 1 mM de DTT, 3H-dTTP y 100 μM de dNTP. Las reacciones se incubaron durante 10 minutos a 75 °C, se sumergieron en hielo y se analizaron mediante el método de Sambrook y Russell (Molecular Cloning, v3, 2001, págs. A8.25-A8.26).
La concentración de proteína se determinó mediante absorbancia OD 280.
La pureza física se evaluó mediante SDS-PAGE de soluciones enzimáticas concentradas y diluidas, seguida de detección mediante tinción de plata. La pureza se evalúa comparando la masa agregada de las bandas contaminantes en la muestra concentrada con la masa de la banda de proteína de interés en la muestra diluida.
La exonucleasa monocatenaria se determinó en una reacción de 50 μL que contenía un sustrato de ADN monocatenario radiomarcado y 10 μL de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.
La exonucleasa bicatenaria se determinó en una reacción de 50 μL que contenía un sustrato de ADN bicatenario radiomarcado y 10 μL de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.
La endonucleasa bicatenaria se determinó en una reacción de 50 μL que contenía 0,5 μg de ADN plasmídico y 10 μL de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.
La contaminación por E. coli se evaluó utilizando muestras replicadas de 5 μL de solución enzimática desnaturalizada y analizada en un ensayo qPCR TaqMan para detectar la presencia de ADN genómico de E. coli contaminante utilizando cebadores oligonucleotídicos correspondientes al locus del ARNr 16S.
Aplicaciones
- Amplificación rutinaria por PCR de fragmentos de ADN de hasta 5 kb
- Amplificación in vitro
- Clonación y genotipificación
Este producto está disponible para aplicaciones de biología molecular como:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924