Qiagen, P7390L, ADN polimerasa Bst X (40.000 U)

40 000 U de ADN polimerasa Bst X (1,0 mL a 40 000 U/mL) y tampón de reacción Xcelerator 10x (1 x 7,0 mL) y solución de sulfato de magnesio 100 mM (1 x 7,0 mL)

Características

- ADN polimerasa termoestable (Bst)
- Sin actividad de exonucleasa 5'→3'
- Sin actividad exonucleasa 3'→5'
- Exhibe una fuerte actividad de desplazamiento de hebras para funcionar bien en tecnologías de amplificación isotérmica LAMP
- Pregunte por formulaciones bajas en glicerol.

Detalles del producto

La ADN polimerasa Bst X es una ADN polimerasa recombinante termoestable de Geobacillus, homóloga de la conocida ADN polimerasa de B. acillus stearothermophilus (Bst). La enzima Bst X es similar a la Bst polimerasa en que carece de actividad exonucleasa 5'→3' y 3'→5' y presenta una fuerte actividad de desplazamiento de cadena, lo que le permite un buen rendimiento en las tecnologías de amplificación isotérmica LAMP. Sin embargo, en comparación con la Bst polimerasa, la Bst X presenta una mayor velocidad de amplificación, tolerancia a la sal y sensibilidad de reacción.

La ADN polimerasa Bst X se suministra en 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, <0,1 % Triton X-100, 50 % glicerol y 10 mM Tris-HCl; pH 7,5 a 25 °C.

La ADN polimerasa Bst X se proporciona con tampón de reacción Xcelerator 10x (B7390) y solución de sulfato de magnesio 100 mM.

El tampón de reacción 10x Bst X Xcelerator (B7390) contiene 2 mM de MgSO₄ a una concentración de 1x. Según la aplicación, podría ser necesario ajustar la concentración final de MgSO₄ de 2 mM a 10 mM.

Pregunte por las formulaciones bajas en glicerol.

Actuación

Prueba: Especificación
Pureza: >99%
Actividad específica: 400.000 U/mg
Exonucleasa monocatenaria: 4000 U; <5,0 % liberado
Exonucleasa bicatenaria: 4000 U; <1,0 % liberado
Endonucleasa bicatenaria: 4000 U; sin conversión
Contaminación de ADN por E. coli: 4000 U; < 10 copias

- Temperatura de reacción óptima de 60-70°C.
- Inactivado por calor a 80°C después de 10 minutos de incubación.
- Alta tolerancia a los detergentes no iónicos Tween-20, Tween-80, Triton X-100 y NP-40 (hasta 5% de concentración final).
Activo en sal de 40 a 125 mM. • Temperatura alterna: Aproximadamente 15 % de actividad a 37 °C. Aproximadamente 5 % de actividad a 25 °C.

- Temperatura de almacenamiento: –25°C a –15°C
- Peso molecular: 66,5 kDa

Propiedades

Principio

Fuente de proteína enzimática recombinante La proteína es producida por una cepa de E. coli recombinante que lleva el gen de la ADN polimerasa (exo-) polimerasa Bst X.

Definición de unidad: Una unidad se define como la cantidad de polimerasa necesaria para convertir 10 nmol de dNTP en material insoluble en ácido en 30 minutos a 65 °C.

Procedimiento

Análisis de control de calidad. La actividad unitaria se mide mediante un método de dilución seriada doble. Se realizaron diluciones del lote de enzima en tampón de reacción 1x y se añadieron a reacciones de 50 μl que contenían ADN de timo de ternera, tampón PCR II 1x, 3H-dTTP y 100 μM de dNTP. Las reacciones se incubaron durante 10 minutos a 65 °C, se colocaron en hielo y se analizaron mediante el método de Sambrook y Russell (Molecular Cloning, v3, 2001, págs. A8.25-A8.26).

La concentración de proteínas se determina mediante la absorbancia OD 280.

La pureza física se evalúa mediante SDS-PAGE de soluciones enzimáticas concentradas y diluidas, seguida de detección mediante tinción de plata. La pureza se evalúa comparando la masa agregada de las bandas contaminantes en la muestra concentrada con la masa de la banda correspondiente a la proteína de interés en la muestra diluida.

La exonucleasa monocatenaria se determina en una reacción de 50 µl que contiene un sustrato de ADN monocatenario radiomarcado y 10 µl de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.

La actividad de la exonucleasa bicatenaria se determina en una reacción de 50 µl que contiene un sustrato de ADN bicatenario radiomarcado y 10 µl de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.

La actividad de la endonucleasa bicatenaria se determina en una reacción de 50 µl que contiene 0,5 µg de ADN plasmídico y 10 µl de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.

La contaminación por E. coli se evalúa utilizando muestras replicadas de 5 µl de solución enzimática que se desnaturalizan y se analizan en un ensayo qPCR TaqMan para detectar la presencia de ADN genómico de E. coli contaminante utilizando cebadores de oligonucleótidos correspondientes al locus del ARNr 16S.

Aplicaciones

- Amplificación isotérmica LAMP
- Amplificación isotérmica

Este producto es adecuado para las siguientes aplicaciones de ensayo.