Qiagen, P7610L, VeraSeq PCR Mix (2x, 250 reacciones)

250 reacciones (paquete de evaluación) de 2x VeraSeq PCR Mix (1 x 6,25 mL)

Características

- 2x mezcla maestra basada en VeraSeq™ 2.0 (n.° de cat. P7511L)
- 50 veces mayor fidelidad que la ADN polimerasa Taq
- Polimerasa ultratermoestable
- Se extiende 1 kb en 15 segundos
- Fuerte actividad de corrección (actividad de exonucleasa 3'→5')

Detalles del producto

VeraSeq™ PCR Mix es una solución 2x ​​premezclada y lista para usar que contiene ADN polimerasa de alta fidelidad VeraSeq™ 2.0 (P7511L), dNTPS, MgCl₂ y tampón de reacción en concentraciones óptimas para maximizar la velocidad, precisión y duración de la síntesis de ADN. Esta fórmula permite aplicaciones eficientes de alta fidelidad para la amplificación, clonación y biología sintética de ADN.

Actuación

Prueba: Especificación
Ensayo funcional: amplificación de un fragmento de 500 pb de ADN genómico

- Temperatura de almacenamiento: –25°C a –15°C
- Velocidad de extensión: 15 segundos por kb a 72 °C
- Corrección de pruebas (3'→5' exo): Sí, fuerte
- Traducción de apodo (5'→3' exo): No
- Fidelidad: >50 veces mayor que la Taq ADN polimerasa
- Desplazamiento de hebra: No
- Termoestabilidad: Altamente termoestable
- Capaz de extender un cebador de ARN: No
- Se extiende desde un nick: No
- Generar productos finales romos: Sí
- Lectura de uracilo: No

Propiedades de la polimerasa

Principio

Fuente de proteína enzimática recombinante La proteína es producida por una cepa de E. coli recombinante que lleva el gen VeraSeq™ 2.0 diseñado.

Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar 10 nmoles de dNTP en una forma insoluble en ácido a 74 °C en 30 minutos.

Procedimiento

Componente: Volumen (µL)
H 2 O estéril: 20, variable
Mezcla de PCR 2x VeraSeq: 25
Cóctel de cebadores de PCR: 5
ADN de la biblioteca*: Variable

Paso: Temperatura
Desnaturalización inicial: 98°C
Extensión de recocido por desnaturalización: 98 °C 60 °C 72 °C
Extensión final: 72°C 4°C

Protocolo: Se deben tomar precauciones generales al preparar una PCR, incluyendo la preparación de la reacción en hielo, la adición final de la mezcla maestra, el pipeteo suave, la mezcla completa y una centrifugación rápida. El siguiente procedimiento puede utilizarse como guía. Es posible que sea necesario optimizar las reacciones individualmente.

Configuración de la reacción (para 50 µL)

* Los volúmenes totales de reacción de la biblioteca de ADN y el agua deben ajustarse para lograr un volumen de reacción final de 50 µL. Si el volumen de reacción debe ser >50 µL, el volumen de la mezcla maestra 2x debe ajustarse para que constituya el 50 % del volumen de reacción final.

* Es posible que sea necesario optimizar las condiciones del ciclo, dependiendo del amplicón de interés. † El número de ciclos depende de la cantidad de ADN de entrada y otros requisitos específicos de análisis de secuencia.

Análisis de control de calidad

La funcionalidad de la mezcla para PCR 2x VeraSeq™ se evalúa por su capacidad para amplificar un fragmento de 500 pb de ADN genómico. Tras la PCR, el fragmento de 500 pb se visualizó mediante electroforesis en gel de agarosa.

Pruebas de contaminación

La mezcla para PCR VeraSeq™ se analizó antes del ensamblaje y se determinó que estaba libre de endonucleasas contaminantes. La pureza de la enzima fue >99%, según lo determinado por SDS-PAGE, y la qPCR confirmó una contaminación insignificante con ADN genómico de E. coli. La actividad específica se verificó antes y después de la dilución.

Aplicaciones

- Amplificación de ADN de alta fidelidad
- Clonación
- Biología sintética

Este producto está disponible para aplicaciones de biología molecular como: