Product Description
Grado ultrapuro: Polvo liofilizado blanco. Almacenamiento: -20 °C.
Características
- Alta actividad a temperaturas elevadas (hasta 56°C) y en condiciones desnaturalizantes.
- Estable en un amplio rango de pH de 4,0 a 12,5 para su uso en una variedad de aplicaciones.
- Pureza excepcional con una cantidad reducida de enzima recombinante de ADN del huésped para evitar contaminación por reactividad cruzada en NGS/diagnóstico
Detalles del producto
La proteinasa K es una serina proteasa relacionada con la subtilisina derivada del Parengyodontium album (Tritirachium album) que es activa en una amplia gama de condiciones de reacción, incluidas temperaturas elevadas y la presencia de dodecil sulfato de sodio (SDS).
Es una endopeptidasa de amplio espectro con una actividad específica muy alta que permite una digestión altamente efectiva de proteínas, incluidas DNasas y RNasas, durante las preparaciones de ácidos nucleicos sin comprometer la integridad del ADN o ARN aislados.
La enzima se expresa en Pichia pastoris y se somete a una purificación exhaustiva para obtener un producto de la más alta calidad. Una tecnología de purificación adicional aumenta significativamente la solubilidad (2,5 veces), incrementa la actividad específica y produce una pureza notable con un contenido de ADN ≤0,1 pg/mg para la proteinasa K ultrapura.
La proteinasa K está libre de exonucleasas, endonucleasas y ribonucleasas.
La proteinasa K Ultrapure se desarrolló con tecnología de purificación adicional que da como resultado una solubilidad significativamente mayor (2,5 veces), una mayor actividad específica y una pureza notable con un contenido de ADN ≤0,1 pg/mg.
Una unidad de proteinasa K hidroliza la hemoglobina desnaturalizada con urea produciendo el equivalente de color de 1 μmol de tirosina por 1 minuto a 37 °C y pH 7,5 (método de Folin y Ciocalteu), 1 U = 1 mAnsonU.
Actuación
Ensayo: Especificación del polvo y la solución de proteinasa K
Contenido de proteínas: >70%
Solubilidad en agua: ≥20 mg/mL
Actividad: ≥30 U/mg liofilizado ≥40 U/mg proteína ≥800 U/mL líquido
Contenido de ADN: ≤10 pg/mg ≤200 pg/mL
Exonucleasa monocatenaria: No detectada
Exonucleasa bicatenaria: No detectada
Endonucleasa bicatenaria: No detectada
Principio
- No se detectó actividad de exonucleasa, endonucleasa o ARNasa.
- Solubilidad en agua ≥20 mg/mL; actividad ≥30 U/mg de liofilizado; actividad específica ≥40 U/mg de proteína; contenido proteico ≥70%; contenido de ADN ≤10 pg/mg
- Condiciones de envío: Temperatura ambiente
- No se detectó actividad de exonucleasa, endonucleasa o ARNasa.
- Concentración ≥20 mg/mL; actividad ≥800 U/mL; contenido de ADN ≤200 pg/mL; carga biológica ≤1 UFC/mL
- Condiciones de envío: Temperatura ambiente
- Tampón de almacenamiento: 10 mM Tris-HCl, pH 7,5; 1 mM (CH3COO)2Ca; 50 % glicerol
- No se detectó actividad de exonucleasa, endonucleasa o ARNasa.
- Solubilidad en agua ≥ 50 mg/mL; actividad ≥ 35 U/mg de liofilizado; actividad específica ≥45 U/mg de proteína; contenido proteico ≥70%
- Contenido de ADN ≤0,1 pg/mg
- Condiciones de envío: Temperatura ambiente
La proteinasa K es una serina proteasa recombinante de amplio espectro de 28,9 kDa de Parengyodontium album (Tritirachium album), expresada en Komagataella phaffii (Pichia pastoris), que se utiliza para la digestión de proteínas y la eliminación de contaminantes durante la preparación de ácidos nucleicos. Escinde el enlace peptídico adyacente al grupo carboxilo de aminoácidos alifáticos, aromáticos y otros aminoácidos hidrofóbicos. Gracias a su amplia especificidad y alta estabilidad en un amplio rango de pH y temperatura, la proteinasa K se utiliza habitualmente en numerosas aplicaciones de biología molecular, como el aislamiento de ADN y ARN genómicos, plasmídicos y de alto peso molecular, y en la inactivación de ARNasas y ADNasas. También se utiliza para la digestión eficaz de proteínas estructurales, cromatinas e inactivación de nucleasas y ARNasas.
La preparación de muestras de alta calidad es un paso esencial antes del análisis molecular del material genético. Este procedimiento incluye múltiples etapas, como el aislamiento de la muestra, la purificación y la concentración del producto objetivo, donde la proteinasa K desempeña un papel fundamental. A pesar de los diversos reactivos utilizados en el proceso, la atención inicial debe centrarse en la proteinasa K, cuya calidad certificada garantiza la alta pureza de los ácidos nucleicos analizados.
Polvo de proteinasa K
El polvo de proteinasa K es un polvo blanco liofilizado, altamente activo y con una consistencia excepcional entre lotes (véase la figura "Alta consistencia entre lotes del polvo de proteinasa K"), lo que garantiza la reproducibilidad para condiciones de trabajo estables y resultados experimentales repetibles y fiables. El polvo de proteinasa K es altamente estable cuando se almacena a -20 °C (véase la figura "Estabilidad del polvo de proteinasa K").
Especificaciones del polvo de proteinasa K:
Solución de proteinasa K
La solución de proteinasa K es un líquido transparente e incoloro con estabilidad a largo plazo cuando se almacena a temperatura ambiente. No necesita refrigeración (véase la figura «Líquido de proteinasa K de alta estabilidad»). El proceso de fabricación establecido garantiza una alta consistencia entre lotes (véase la figura «Líquido de proteinasa K de alta consistencia entre lotes»).
Especificaciones de la solución de proteinasa K:
Proteinasa K Ultrapura
Proteinase K Ultrapure es un polvo blanco liofilizado con mayor actividad y solubilidad para las aplicaciones más exigentes y menor contenido de ADN para aplicaciones sensibles y sin contaminación cruzada.
Especificación de la proteinasa K ultrapura:
Procedimiento
Control de calidad
La concentración de proteína se determinó midiendo la absorbancia a 280 nm.
La presencia de exonucleasa se determinó mediante electroforesis en gel de 1 μg de ADN λ digerido con HindIII con 50 μg de proteinasa K incubado durante 16 horas a 37 °C.
La presencia de endonucleasa se determinó mediante electroforesis en gel de 1 μg de ADN pUC19 con 40 μg de proteinasa K incubado durante 16 horas a 37°C.
La presencia de actividad ARNasa se determinó mediante electroforesis en gel de 2 µg de ARNr de E. coli con 20 μg de proteinasa K incubado durante 4 horas a 37 °C.
Uso
Preparación de la solución madre de proteinasa K
Soluciones de 20 mg/mL: utilizar agua purificada para uso inmediato.
Soluciones de 20–50 mg/mL: utilice 50 mM Tris-HCl, pH = 7,5-8,0, 1-5 mM Ca 2+ (cloruro de calcio, acetato de calcio) para uso inmediato; o 10 mM Tris-HCl, pH = 7,5-8,0, 1-5 mM Ca 2+ (cloruro de calcio, acetato de calcio), 50 % de glicerol para almacenamiento a largo plazo.
Aplicaciones
- Extracción de ADN y ARN de diferentes materiales de partida
- Eliminación de DNasas y RNasas durante el aislamiento de ácidos nucleicos
- Purificación de muestras contaminadas con diferentes proteínas
- Automatización de estaciones de aislamiento
Este producto está disponible para aplicaciones de biología molecular como:
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