Product Description
500 μL de Stoffel, 2 U/μL de ADN polimerasa, 4 x 1,25 mL, tampón Stoffel 10x, 4 x 1 mL, 50 mM de MgCl₂. Temperatura de almacenamiento: -20 °C
Características
- Muestra un rendimiento máximo con una formulación de tampón de reacción mejorada
- Sin actividad de exonucleasa
- Alta termoestabilidad; la vida media de la enzima es de 20 minutos a 97,5 °C.
- Amplifica fragmentos de hasta 5 kb y deja salientes 'A'
Detalles del producto
La ADN polimerasa Stoffel es un fragmento recombinante de 62,7 kDa de la ADN polimerasa Taq termoestable, aislada de Thermus aquaticus. Se recomienda para una amplia gama de aplicaciones que requieren la síntesis de ADN a temperaturas extremadamente altas.
La termoestabilidad de la ADN polimerasa Stoffel es aproximadamente el doble que la de la ADN polimerasa TaqNova. Requiere una mayor concentración de MgCl₂ y una menor fuerza iónica para una actividad enzimática óptima. El alto contenido óptimo de magnesio de la ADN polimerasa Nova Stoffel reduce la necesidad de realizar experimentos de optimización de magnesio. Facilita la optimización por PCR multiplex, que consiste en la amplificación simultánea de múltiples dianas en la misma reacción.
La deleción de Stoffel (5'→3' exo-) hace que la enzima sea ligeramente más termoestable y con una fidelidad ligeramente mayor que la Taq de longitud completa, y se recomienda encarecidamente para plantillas ricas en GC y de estructura secundaria. Las sondas de hibridación en los ensayos Light-Cycler no deben hidrolizarse; por lo tanto, la precisión de las mediciones cuantitativas mejora con el Fragmento de Stoffel, que carece de actividad endonucleolítica.
La mayor estabilidad térmica de TaqNova Stoffel puede conducir a una amplificación superior de plantillas excesivamente ricas en GC y plantillas con estructura secundaria al permitir temperaturas de desnaturalización de hasta 98 °C.
Se suministra con 20 mM Tris-HCl (pH 8,0 a 25°C), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5% (v/v) Nonidet P40, 0,5% (v/v) Tween 20, 50% (v/v) glicerol.
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar 10 nmol de dNTP a una fracción de ADN insoluble en 30 minutos a 72 °C en una reacción de 50 μL.
Principio
El fragmento Stoffel está codificado por una forma modificada del gen de la ADN polimerasa de Thermus aquaticus, insertado en un hospedador de Escherichia coli. El gen modificado codifica un fragmento de 540 aminoácidos que carece de la porción N-terminal de 292 aminoácidos de la ADN polimerasa TaqNova de longitud completa.
La actividad de la ADN polimerasa Stoffel es óptima a baja fuerza iónica, por lo que el tampón Stoffel 10x es el tampón de reacción optimizado y recomendado para esta enzima. El uso de un tampón de reacción diferente puede reducir significativamente la actividad enzimática. La ADN polimerasa Stoffel tiene un amplio rango óptimo de MgCl₂ (2,5-5 mM) y generalmente requiere concentraciones más altas de iones magnesio que la ADN polimerasa TaqNova. Una concentración de MgCl₂ de 3 mM es el punto de partida sugerido para la optimización del protocolo de PCR.
Procedimiento
Control de calidad
La contaminación por DNasa se evalúa mediante extensas reacciones de PCR.
Aplicaciones
- Amplificación de secuencias de tamaño corto y mediano
- PCR diagnóstica y multiplex
- Genotipado: muestra un gran rendimiento en el mapeo genético utilizando cebadores con secuencias arbitrarias (RAPD)
- PCR de amplificación específica de alelos (ASA PCR): la amplificación depende de las bases terminales 3' que complementan el cebador
- Extensión de cebador
- Ensayos de ciclo de luz debido a la falta de exonucleasa 5'-3' en la enzima
Esto se utiliza para aplicaciones como:
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