Qiagen, RP905A, TaqNova HS ADN polimerasa (500 U)

TaqNova HS ADN polimerasa, tampón de reacción TaqNova HS 10x, 50 mM MgCl2 Temperatura de almacenamiento: -20 °C

Características

- Cataliza la síntesis de ADN en dirección 5' → 3'
- No muestra actividad exonucleasa 3' → 5' pero tiene actividad exonucleasa 5' → 3'
- Permite una fácil configuración de una reacción de PCR de inicio en caliente a temperatura ambiente
- Minimiza la amplificación de productos no específicos y dímeros de cebadores.
- Amplifica fragmentos de hasta 5 kb y deja salientes 'A'

Detalles del producto

La ADN polimerasa TaqNova HS es una mezcla de la ADN polimerasa Taq termoestable recombinante de Thermus aquaticus y un anticuerpo monoclonal altamente específico que actúa como inhibidor de la actividad de polimerización. La TaqNovaHS facilita la configuración de una reacción de PCR de inicio en caliente a temperatura ambiente.

Se recomienda para una amplia gama de aplicaciones exigentes que requieren una amplificación altamente específica. La polimerasa TaqNovaHS es una ADN polimerasa universal y fácil de usar que funciona con rapidez y eficacia en diversas condiciones de PCR. La enzima cataliza la síntesis de ADN en dirección 5' → 3' y no presenta actividad exonucleasa 3' → 5', pero sí 5' → 3'.

Se suministra con 20 mM Tris-HCl (pH 8,0, 25°C), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5% (v/v) Nonidet P40, 0,5% (v/v) Tween 20, 50% (v/v) glicerol.

Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar 10 nmol de dNTP a una fracción de ADN insoluble en 30 minutos a 75 °C en una reacción de 50 μL.

Actuación

Ensayo: Especificación
Actividad funcional: Aprobado
Contaminación por DNasa: No se detectó ninguna

Principio

El anticuerpo se une reversiblemente a la enzima, inhibiendo la actividad de la polimerasa a temperatura ambiente. Esto impide la extensión de cebadores no específicamente hibridados y dímeros de cebadores formados a bajas temperaturas durante la configuración de la PCR. El anticuerpo se libera de la polimerasa en condiciones normales de ciclado. El uso de la polimerasa TaqNovaHS no requiere ningún paso de incubación adicional para activar la enzima.

Procedimiento

Control de calidad

La actividad y la contaminación por DNasa se evaluaron incubando 1 μg de ADN con 10 unidades de la enzima durante 4 horas a 37 °C. Los resultados se visualizaron en un gel de agarosa teñido con bromuro de etidio. El producto se analizó exhaustivamente mediante PCR.

Aplicaciones

- PCR de arranque en caliente y en tiempo real
- PCR simple y multiplex
- PCR con ADN de varios tipos de muestras
- Amplificación específica de plantillas difíciles (ricas en GC)

Esto se utiliza para aplicaciones como: