Qiagen, Y9260L, RecA (1,5 mg)

1,5 mg (paquete de evaluación) de RecA (0,75 ml a 2,0 mg/ml) y tampón de reacción RecA 10X (1,5 ml)

Características

- Promueve el intercambio de cadenas de ADN monocatenario con ADN dúplex homólogo.
- Un complejo de ADN monocatenario RecA–ATP puede funcionar como una coproteasa
- Los complejos con oligonucleótidos específicos del sitio se pueden utilizar para identificar y escindir específicamente fragmentos grandes de ADN.

Detalles del producto

RecA, que participa en la recombinación y reparación del ADN (1, 2, 3), se une al ADN monocatenario, lo que resulta en su polimerización en un complejo nucleoproteico. Este complejo se alinea con el ADN bicatenario complementario, lo que resulta en la catálisis del intercambio de cadenas de ADN por RecA. La unión de RecA al ADN se estimula mediante la hidrólisis de ATP o análogos de ATP no hidrolizables. El complejo RecA-ATP-ADN monocatenario también funciona como un factor de coproteasa en la escisión proteolítica de LexA, UmuD y ciertas proteínas de bacteriófagos. RecA en complejo con oligonucleótidos sitio-específicos se ha utilizado para dirigir y escindir específicamente fragmentos grandes de ADN (4).

Se suministra en: 10 mM Tris-Cl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA y 50% glicerol; pH 7,5 a 25 °C.

Se suministra con: tampón de reacción RecA 10X (B9260): 700 mM Tris·Cl, 100 mM MgCl2 y 50 mM DTT; pH 7,6 a 25 °C.

Actuación

Prueba: Cantidad analizada
Pureza: N/A
Exonucleasa monocatenaria: 2 µg
Exonucleasa bicatenaria: 2 µg
Endonucleasa bicatenaria: 2 µg
Contaminación de ADN de E. coli: 5 µg

- Temperatura de almacenamiento: –25°C a –15°C
- Peso molecular: 37,973 Daltons

Propiedades de las enzimas

Principio

Fuente de proteína enzimática recombinante La proteína es producida por una cepa de E. coli que sobreexpresa el gen recA de E. coli a partir de un plásmido.

Definición de unidad: Vendido por masa de proteína pura determinada a DO 280 (A 280 = 0,516 a 1 mg/m, 1 cm).

Procedimiento

Análisis de control de calidad

La concentración de proteínas se determina mediante la absorbancia OD 280.

La pureza física se evalúa mediante SDS-PAGE de soluciones enzimáticas concentradas y diluidas, seguida de detección mediante tinción de plata. La pureza se evalúa comparando la masa agregada de las bandas contaminantes en la muestra concentrada con la masa de la banda correspondiente a la proteína de interés en la muestra diluida.

La exonucleasa monocatenaria se determina en una reacción de 50 µl que contiene un sustrato de ADN monocatenario radiomarcado y 10 µl de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.

La actividad de la exonucleasa bicatenaria se determina en una reacción de 50 µl que contiene un sustrato de ADN bicatenario radiomarcado y 10 µl de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.

La actividad de la endonucleasa bicatenaria se determina en una reacción de 50 µl que contiene 0,5 µg de ADN plasmídico y 10 µl de solución enzimática incubada durante 4 horas a 37 °C.

La contaminación por E. coli se evalúa utilizando muestras replicadas de 5 µl de solución enzimática que se desnaturalizan y se analizan en un ensayo qPCR TaqMan para detectar la presencia de ADN genómico de E. coli contaminante utilizando cebadores de oligonucleótidos correspondientes al locus del ARNr 16S.

Aplicaciones

- Mutagénesis
- Captura por afinidad de ADNc

Este producto está disponible para aplicaciones de biología molecular como:

Referencias: 1. Cox, MM (2007) Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 42:41. 2. Bell, CE (2005) Mol. Microbiol. 58:358. 3. Xing, X., Bell, CE (2004) J. Mol. Biol. 342:1471. 4. Ferriny, LJ., Camerini-Otero, RD (1991) Science 254:1494.