Revvity, 61HI2DLF, conjugado mAb d2 anti-6His HTRF, 1000 puntos de ensayo

Descripción general
El anticuerpo monoclonal anti-6HIS-d2 es una IgG2a generada contra una proteína de fusión marcada con polihistidina y marcada con d2. Reconoce la polihistidina sintética o la proteína de fusión marcada con polihistidina.
Este reactivo se puede utilizar tanto en formato bioquímico como celular para estudiar una amplia variedad de interacciones: proteína/proteína, proteína/péptido, proteína/ADN, proteína/ARN, proteína/carbohidrato, proteína/molécula pequeña, receptor/ligando.
HTRF puede detectar una amplia gama de constantes de afinidad que van desde picomolar hasta milimolar bajo.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo
En un ensayo de interacción HTRF, un componente se marca (directa o indirectamente) con el donante y el otro con el aceptor (de nuevo, directa o indirectamente). La intensidad de la señal es proporcional a la unión de ambos componentes. En el ejemplo mostrado: el anticuerpo monoclonal anti-6HIS-d2 se une al componente A marcado con 6 His, mientras que el componente B* se une a un anticuerpo específico marcado con un donante HTRF. *El componente B también puede estar biotinilado, marcado y fusionado a Fc. En estos casos, utilice el reactivo HTRF correspondiente (anti-Tag, anti-especie, protA, estreptavidina) marcado con el donante para la detección.

Protocolo de ensayo
El ejemplo de la derecha describe el protocolo con un volumen final de ensayo de 20 µL para detectar la interacción entre un compañero A marcado con 6 His y un compañero B* sin marcar. Dispensar los dos compañeros (10 µL), incubar, añadir MAb anti 6HIS-d2 (5 µL) y anti-compañero B marcado con donante (5 µL), incubar y leer. *El compañero B también puede estar biotinilado, marcado, fusionado a Fc o marcado directamente. En estos casos, utilizar el reactivo HTRF correspondiente (anti-Tag, antiespecie, protA, estreptavidina) marcado con donante para la detección.

Cree ensayos de interacción HTRF para su aplicación específica
Los reactivos se venden por número de pruebas (reacciones de 20 µL). Los anticuerpos conjugados con XL665 o d2 se suministran a razón de 20 ng de anticuerpo por pocillo. También se indica la cantidad de fracción activa por vial (así como el número de trazadores por vial; consulte la ficha técnica del producto). La fracción activa se define como la parte activa de un conjugado (p. ej., un anticuerpo).

¿Cómo se relaciona el número de pruebas con la fracción activa?
La cantidad promedio de conjugado por pocillo refleja el contenido total de material biológico. Generalmente, se prefiere usar la cantidad de fracción activa en lugar de la cantidad total de conjugado. Para los conjugados Cryptate y d2, la cantidad total de conjugado es igual a la de la fracción activa, ya que el peso molecular del marcador es insignificante. Esto no ocurre con las entidades marcadas con XL665, para las cuales la cantidad total de conjugado varía según la relación molar final del conjugado. Sin embargo, la cantidad de fracción activa, proporcionada por Revvity, es constante y se basa en el número de pruebas solicitadas.

Cantidades recomendadas de conjugados Cryptate y XL665
Los conjugados de criptato no deben ser excesivos para evitar la saturación del lector y un nivel inaceptable de ruido de fondo. En la mayoría de los casos, una concentración de criptato de 1 a 5 nM es adecuada y generará de 20 000 a 80 000 cps a 620 nm, dependiendo del lector compatible con HTRF utilizado. El conjugado XL665 debe ser lo más similar posible a su homólogo de ensayo para que el máximo número de biomoléculas se marquen con el aceptor XL665. Por lo tanto, para detectar una molécula marcada a una concentración de ensayo de 20 nM, la concentración de anti-Tag-XL665 debe ser equimolar o superior. Interacción entre la aplicación y la proteína.
Puntos de ensayo: 1000
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos: viales
Condiciones de envío - Envío a temperatura ambiente
Objetivo-6HIS
Ensayo de unión de clase objetivo
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Autoinmunidad Cardiovascular Enfermedades infecciosas Inflamación Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis Neurociencia Oncología Enfermedades raras Virología
Tamaño de la unidad: 1000 puntos de ensayo