Revvity, 61UBIKLB, HTRF Ubiquitina Eu-Conjugada, 20.000 puntos de ensayo

Descripción general
La ubiquitinación desempeña un papel clave en la regulación de la degradación proteica y se lleva a cabo mediante la conjugación de la ubiquitina con proteínas diana mediante la actividad secuencial de tres enzimas: E1, E2 y E3. Las proteínas poliubiquitinadas son posteriormente degradadas por los proteasomas.
La vía de la ubiquitina se asocia con numerosas patologías, como cáncer, atrofia muscular, inflamación, infecciones virales y trastornos metabólicos y neurodegenerativos. El criptato de ubiquitina-Eu permite el desarrollo flexible de ensayos que evalúan cada paso de la vía de la ubiquitina.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo
Los ensayos de ubiquitina HTRF utilizan ubiquitina marcada con criptato de europio. Tras la adición del conjugado XL665, la señal HTRF es proporcional al nivel de ubiquitinación y se mantiene estable durante más de 24 horas. Aquí se muestra un ejemplo de un ensayo de poliubiquitinación de p53.

Protocolo de ensayo
Los ensayos de ubiquitina HTRF constan de dos fases básicas: la etapa enzimática, seguida de la etapa de detección HTRF. 1. Etapa enzimática: La proteína diana se incuba con las enzimas ubiquitina (E2 y E3) y ubiquitina marcada con Eu3+. La reacción comienza con la adición de la enzima E1. 2. Etapa de detección: La proteína diana ubiquitinada se detecta mediante la adición de un reactivo marcado con XL665 que contiene EDTA para detener la reacción enzimática. Aplicación - Interacción proteína-proteína.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos: reactivo fluorescente
Condiciones de envío - Envío a temperatura ambiente
Ensayo de unión de clase objetivo
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 20.000 puntos de ensayo