Revvity, 62CGTPPEG, kit de unión de proteínas GTP/Gi celulares HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular de unión de GTP/Gi es un formato fluorescente y homogéneo para medir la actividad de la proteína Gi en células a nivel del intercambio de nucleótidos GDP/GTP que caracteriza la activación de GPCR. Por lo tanto, ofrece la ventaja de monitorizar la activación de GPCR en uno de los primeros eventos mediados por receptores. Por lo tanto, proporciona información sobre la fase anterior de la señalización de GPCR, lo cual resulta útil para el estudio de respuestas funcionales.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o el tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de unión celular de GTP Gi
El ensayo de unión celular GTP/Gi está diseñado para la detección simple, rápida y directa de la activación de la proteína Gαi en células permeabilizadas. Es una lectura previa de la activación del receptor acoplado a la proteína Gi. La activación del GPCR provoca el intercambio de nucleótidos GDP/GTP en la subunidad Gα. El principio de este ensayo se basa en la tecnología HTRF™. Utiliza un análogo de GTP no hidrolizable acoplado al donante de criptato de europio fluorescente.
En la práctica, la estimulación del GPCR inducida por agonistas provoca un cambio en la conformación de la proteína Gα y la sustitución del GDP unido a Gα por el análogo fluorescente de GTP en el punto de unión correspondiente. La detección es posible mediante la adición de un anticuerpo monoclonal anti-Gαi marcado con d2 (aceptor rojo). Al aproximar el criptato de europio y d2, la transferencia de energía con resolución temporal entre ellos desencadena una señal TR-FRET en d2. Esta señal específica es proporcional al estado de activación de Gαi. El ensayo permite la caracterización farmacológica directa de compuestos que actúan sobre receptores acoplados a Gαi en células permeabilizadas.

Protocolo de ensayo de unión celular de GTP Gi
El ensayo de unión celular de GTP/Gi se realiza en un formato miniaturizado con un volumen final de 40 µl y cuenta con un protocolo optimizado de adición de reactivos de 4 pasos, donde la permeabilización, la estimulación y la detección se realizan sucesivamente tras sembrar las células durante 24 h. Las placas se leen tras 4 h o una incubación a temperatura ambiente (ON), según el modelo biológico.
Las densidades celulares óptimas, las concentraciones de MgCl₂ y los tiempos de incubación antes de la lectura deben determinarse en función del modelo biológico elegido (modelo celular/receptor/compuesto farmacológico). Aplicación: Detección de segundos mensajeros.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Proteína Target-Gi
Clase objetivo-GPCR
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Enfermedades infecciosas cardiovasculares Inflamación Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis Neurociencia Oncología e inflamación Enfermedades raras
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo