Revvity, 62GTPPEC, kit de unión de proteínas HTRF GTP/Gi, 20 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo de unión de GTP a Gi detecta la actividad de la proteína Gi en el receptor, tras la estimulación con GPCR en extractos de membrana. Este ensayo no isotópico basado en HTRF es sencillo, rápido y no requiere lavado.
El ensayo utiliza GTP gamma S y está destinado a estudios de modelos GPCR y a la identificación y caracterización farmacológica de compuestos.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de unión de GTP Gi
El ensayo de unión de GTP a Gi utiliza un análogo de GTP marcado con criptato (donante) y un anticuerpo anti-Gi marcado con d2 (aceptor). El análogo de GTP se une específicamente al espacio de unión de GTP de las proteínas G activas, mientras que el anticuerpo marcado con d2 es específico de la subunidad Gαi de las proteínas G. La activación del GPCR en presencia de ambos reactivos de detección acerca al donante y al aceptor, lo que desencadena una señal de FRET con una intensidad proporcional a la concentración de proteína Gi activa en la muestra. GTP gamma S, un análogo de GTP no hidrolizable, se utiliza para desplazar al donante del espacio de unión de GTP y extinguir la FRET para determinar la señal no específica del ensayo y garantizar su precisión.

Protocolo de ensayo de placa de unión de GTP Gi
El ensayo de unión de GTP a Gi se realiza en un formato miniaturizado con un volumen final de 20 µl y cuenta con un protocolo optimizado de adición de reactivos de 4 pasos, donde se añaden sucesivamente los compuestos de estimulación, el agonista, los reactivos de detección y las membranas. Las placas se leen tras una incubación de 3 horas o a temperatura ambiente (ON), según el modelo biológico. No se requieren lavados.
Este protocolo utiliza condiciones optimizadas previamente determinadas para el modelo biológico de interés (cantidad óptima de membrana por pocillo y tampón de estimulación n.° 3 suplementado con concentraciones óptimas de MgCl₂ y GDP). El procedimiento de optimización y las recomendaciones se presentan en las guías correspondientes. Aplicación: Detección de segundos mensajeros.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo-GPCR
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Enfermedades infecciosas cardiovasculares Inflamación Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis Neurociencia Oncología e inflamación Enfermedades raras
Tamaño de la unidad: 20.000 puntos de ensayo