Revvity, 62KBBRDD, tampón de unión a quinasa HTRF, 20 ml

Descripción general
El tampón de unión de quinasas se utiliza para realizar ensayos de unión de saturación (determinación de Kd) y/o unión competitiva dentro de la plataforma de unión de quinasas HTRF® únicamente.
Cómo funciona
Principio del ensayo de determinación de Kd
La unión de un trazador fluorescente se detecta mediante un ensayo sándwich utilizando un anticuerpo específico anti-GST, 6HIS o estreptavidina marcado con criptato de europio (donador), que se une a la quinasa marcada, y un trazador fluorescente rojo marcado con d2 (aceptor). El principio de detección se basa en la tecnología HTRF®. La relación HTRF (665/620) aumentará al añadir más trazador y se saturará en función de la constante de disociación (Kd) del trazador a la quinasa marcada. Al añadir un inhibidor de la quinasa, el trazador se desplazará y la señal HTRF desaparecerá, dependiendo de la dosis.

Protocolo de ensayo para la determinación de IC50/Ki
La evaluación farmacológica de los inhibidores de interés se puede realizar en placas de 96 o 384 pocillos.
Primero, se prepara una dilución seriada de inhibidor entre 40 µM y 0,23 nM, y se dispensan 5 µL de cada concentración en la placa. A continuación, se añaden 5 µL de quinasa marcada, seguidos de 5 µL de criptato de eugenol anti-marcador. Finalmente, se añaden 5 µL de solución trazadora, preparada al cuádruple de la concentración final. La razón HTRF se mide tras 1 hora de incubación.
Los análisis de los datos arrojan curvas dosis-respuesta típicas que oscilan entre 10 µM y 56 pM, lo que permite evaluar los valores de CI50/Ki del inhibidor de interés. Aplicación: Ensayo enzimático bioquímico.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos-Buffer
Condiciones de envío - Envío a temperatura ambiente
Clase objetivo: quinasas
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: Metabolismo/Diabetes, Neurociencia, Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 20 ml