Revvity, 62ST3PEB, kit HTRF KinEASE STK-S3, 1000 puntos de ensayo

Descripción general
La serie de kits HTRF KinEASE ofrece un enfoque bioquímico sencillo para estudiar la actividad de las quinasas, detectar inhibidores y caracterizarlos. Tres kits STK y uno TK ofrecen un método semiuniversal para evaluar la fosforilación en residuos de serina/treonina y tirosina, respectivamente. El ensayo HTRF KinEASE STK S3 ha sido validado con 43 quinasas de serina/treonina. La sección de validación de ensayos de esta página las enumera y ofrece consejos técnicos para su configuración. La serie de kits también incluye un kit Discovery para ayudar a determinar cuál de los tres kits STK es adecuado al trabajar con una enzima no validada.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo
Cada kit HTRF KinEASE se basa en el mismo formato de ensayo y utiliza un sustrato biotinilado universal, un anticuerpo monoclonal marcado con Eu-criptato fosfoespecífico y SA-XL665. Los tres sustratos peptídicos STK están compuestos por la misma secuencia para la detección de anticuerpos, junto a una secuencia variable reconocida por enzimas. El residuo diana para la fosforilación se encuentra entre ambas secuencias, la de actividad enzimática (no fosforilada) y la de detección de anticuerpos (fosforilada). Se ha demostrado que tres secuencias variables diferentes podrían permitir el estudio de la mayoría de las serina/treonina quinasas.

Protocolo de ensayo
Como se muestra aquí, todos los ensayos HTRF KinEASE funcionan de la misma manera e implican dos pasos:
Paso 1: Reacción de la quinasa. La quinasa se incuba en presencia o ausencia de compuestos y del sustrato adecuado. El tampón enzimático suplementado se añade al tampón de quinasa solo para quinasas tiroideas. Se añade ATP para iniciar la reacción.
Paso 2: Se añaden los conjugados de detección Eu-cryptate y XL665. El tampón de detección contiene EDTA para detener la reacción enzimática. Aplicación: Ensayo enzimático bioquímico.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío a temperatura ambiente
Clase objetivo: quinasas
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: Metabolismo/Diabetes, EHNA/Fibrosis, Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 1000 puntos de ensayo