Revvity, 63ADK108PEH, kit de detección de IRAK4 total humano HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
IRAK4 (quinasa 4 asociada a IL-1R) es una serina-treonina quinasa esencial en la cascada de señalización asociada a los receptores tipo Toll. IRAK4 participa en la producción de citocinas proinflamatorias mediante la activación de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK) mediada por NF-κB, así como en la secreción de IFNα/β a través de los factores de respuesta al interferón 3 y 7 (IRF3/7).
Este ensayo basado en células mide la modulación de los niveles de la proteína IRAK4.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo IRAK4 total
Este ensayo de IRAK4 total cuantifica el nivel de expresión de IRAK4 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, el ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-IRAK4 utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de IRAK4 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de IRAK4 total
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total IRAK4 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de IRAK4 total en una placa
La detección de IRAK4 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una robusta calidad HTRF. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología de la inflamación e inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo