Revvity, 64ARV7PEG, kit de detección del receptor de andrógenos HTRF (variante 7/AR-V7), 500 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo de detección de la variante 7 del receptor de andrógenos HTRF monitorea la expresión de la variante 7 del empalme del receptor de andrógenos (AR-V7), brindando información sobre su presencia, ya sea endógena o sobreexpresada, dentro de varias células.
El receptor de andrógenos es un receptor nuclear que se activa por hormonas androgénicas, como la testosterona (T) y la dihidrotestosterona (DHT). Los andrógenos se unen al dominio de unión al ligando del receptor de andrógenos, lo que provoca la homodimerización del receptor y su translocación al núcleo. Posteriormente, se activan las vías de expresión génica y señalización posteriores, incluida la vía PI3K/AKT. La expresión génica inducida por el receptor de andrógenos promueve la división celular, la proliferación, la diferenciación, la apoptosis y la angiogénesis. La desregulación de la vía del receptor de andrógenos puede dar lugar a fenotipos oncogénicos, habiéndose vinculado la activación o subexpresión del receptor de andrógenos a enfermedades como el cáncer de próstata, el cáncer de mama, el glioblastoma y otras neoplasias malignas. Además, se expresan variantes del receptor de andrógenos en diversas líneas celulares de cáncer humano.
La variante 7 del receptor de andrógenos (AR-V7) es una variante de empalme del ARNm del receptor de andrógenos, caracterizada por un dominio de unión al ligando truncado. Presenta actividad constitutiva y se expresa ampliamente en líneas celulares de cáncer humano. Entre las AR-V descritas hasta la fecha, la AR-V7 es la más ampliamente evaluada y caracterizada, y se han desarrollado varias pruebas sanguíneas para su detección.
Por lo tanto, el receptor de andrógenos, y en particular la variante 7, se ha convertido en una importante diana farmacológica para la industria farmacéutica. El desarrollo de compuestos PROTAC dirigidos a la degradación del receptor de andrógenos es una estrategia terapéutica popular para tratar los cánceres con receptores de andrógenos positivos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de la variante 7 del receptor de andrógenos HTRF

El ensayo HTRF para la variante 7 del receptor de andrógenos humano cuantifica el nivel de expresión del receptor de andrógenos en un lisado celular. A diferencia del Western blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia del receptor de andrógenos en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas para la variante 7 del receptor de andrógenos humanos

El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de la variante 7 del receptor de andrógenos humano. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de placa única para la variante 7 del receptor de andrógenos humanos

La detección de la variante 7 del receptor de andrógenos humano con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo