Revvity, 64AT3V2PET, kit de detección de Tyr705 de fosfo-STAT3 humano y murino de alto rendimiento HTRF, 96 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF de alto rendimiento permite la detección rápida, cuantitativa y altamente sensible de STAT3 fosforilada en Tyr705 como lectura de la actividad de señalización JAK/STAT. En comparación con la versión estándar, el formato de alto rendimiento ofrece una mayor relación señal-ruido y una mayor sensibilidad, lo que garantiza resultados más robustos incluso en condiciones difíciles. Estas mejoras permiten obtener resultados fiables en modelos más fisiológicos, como células primarias, lo que amplía la aplicabilidad del ensayo para la investigación traslacional y avanzada. STAT3 se sobreexpresa en diversas enfermedades, en particular trastornos autoinmunes, enfermedades neurodegenerativas y cánceres, lo que convierte a este kit en una potente herramienta para estrategias terapéuticas mediante la inhibición de la vía.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o el tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de alto rendimiento Phospho-STAT3 (Tyr705)
El ensayo de alto rendimiento fosfo-STAT3 (Tyr705) mide la fosforilación de STAT3 en Tyr705. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se une específicamente al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo reconoce la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, acercando el fluoróforo donante al aceptor y generando una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada en la muestra, lo que permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de alto rendimiento para fosforilación STAT3 (Tyr705)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de alto rendimiento fosfo-STAT3 (Tyr705). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una sola placa de alto rendimiento Phospho-STAT3 (Tyr705)
La detección de STAT3 fosforilado (Tyr705) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-STAT3
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 96 puntos de ensayo