Revvity, 64AT6PEG, kit de detección de fosforilación humana HTRF (Tyr641), 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células está diseñado para monitorear la fosforilación de STAT6 en Tyr641, lo que representa un sello distintivo de su activación.
STAT6 es un factor de transcripción activado principalmente por el receptor IL4, así como por los receptores IL3, IL13 o IFNa. STAT6 es fosforilado en la tirosina 641 por las quinasas Janus, lo que conduce a la formación de homodímeros o heterodímeros con STAT2. Finalmente, STAT6 activado se transloca al núcleo y media la expresión génica inducida por citocinas.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-STAT6 (Tyr641)
El ensayo Phospho-STAT6 (Tyr641) mide la fosforilación de STAT6 en Tyr641. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-STAT6 (Tyr641) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de fosfo-STAT6 (Tyr641)
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-STAT6 (Tyr641). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosforilación STAT6 (Tyr641)
La detección de STAT6 fosforilado (Tyr641) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Enfermedades infecciosas, oncología e inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo