Revvity, 64ATG16S8PEG, kit de detección de fosfo-ATG16L1 (Ser278) humano y murino HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína relacionada con la autofagia 16 similar a 1 (ATG16L1) es esencial para la autofagia. ATG16L1 se recluta al fagóforo y recluta el complejo ATG5-ATG12, lo que facilita la lipidación de LC3 (conversión de LC3-I a LC3-II) y contribuye a la maduración del autofagosoma.
La fosforilación de ATG16L1 en Ser278 solo está presente en autofagosomas de nueva formación, lo que convierte su cuantificación en un indicador ideal para la formación de vesículas autofágicas y la inducción de la autofagia. ATG16L1 está implicada en enfermedades como la enfermedad de Alzheimer, el cáncer colorrectal, las cardiopatías, el cáncer de mama y la leucemia mieloide crónica.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF Phospho-ATG16L1 (Ser278)
El ensayo HTRF Fosfo-ATG16L1 (Ser278) mide la fosforilación de ATG16L1 en la serina 278. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo HTRF Fosfo-ATG16L1 (Ser278) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a los dos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas HTRF Phospho-ATG16L1 (Ser278)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-ATG16L1 (Ser 278). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para HTRF Phospho-ATG16L1 (Ser278)
La detección de ATG16L1 fosforilada (Ser 278) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo