Revvity, 64ATMS1PEG, kit de detección de fosforilación humana HTRF-ATM (Ser1981), 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF permite la detección rápida y cuantitativa de ATM fosforilada en la serina 1981, como indicador de la vía de señalización ATM/CHK2 tras una respuesta al daño del ADN (DDR). Este kit complementa la fosfo-CHK2 Thr68 para estudios de la vía ATM-CHK2.
En respuesta al daño del ADN, como las roturas de doble cadena (DSB), se activan la vía ATM-Chk2 y las respuestas de los puntos de control de replicación. Estas median los puntos de control G1/S para detener la progresión del ciclo celular y permitir la reparación del ADN.
En respuesta a las DSB del ADN, ATM se autofosforila para generar la quinasa monomérica activa. La activación de ATM resulta en la fosforilación de una amplia gama de dianas posteriores, como el miembro X de la familia de histonas H2A, H2Ax, o la quinasa de punto de control Chk2 y sus efectores posteriores.
Cómo funciona
Principio del ensayo ATM de fosforilación HTRF
El ensayo Phospho-ATM (Ser1981) mide la ATM cuando se fosforila en serina 1981. A diferencia del Western Blot, el ensayo se basa completamente en placas y no requiere geles, electroforesis ni transferencia.
El ensayo Phospho-ATM (Ser 1981) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo entre los dos anticuerpos marcados, que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas HTRF Phospho-ATM Ser 1981
El protocolo de 2 placas implica cultivar células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y luego transferir lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de la adición de los reactivos de detección HTRF fosfo-ATM ser 1981.
Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa HTRF Phospho-ATM Ser 1981
La detección de ATM Ser 1981 fosforilada con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado.
Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo