Revvity, 64ATUBPEG, kit de mantenimiento de α-tubulina HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo está diseñado para medir el nivel de expresión endógena de alfa-tubulina en células y tejidos con el fin de normalizar los datos obtenidos sobre la(s) fosfoproteína(s) y/o proteína(s) total(es) de interés. Debido a su papel esencial en el citoesqueleto celular, la alfa-tubulina se expresa de forma ubicua y constitutiva en todos los tejidos. Además, su secuencia de aminoácidos está altamente conservada y, por lo tanto, es idéntica en casi todas las especies. Estas características la convierten en una de las proteínas constitutivas más utilizadas. Su concentración es proporcional al número de células y a la concentración total de proteína, por lo que se utiliza como control interno para la normalización de datos y corregir los cambios de señal causados ​​por la variabilidad experimental (p. ej., número de células restantes en la placa de cultivo tras el tratamiento o eficacia de la lisis). El bajo volumen de muestra de 4 µL y su compatibilidad con todos los tampones de lisis HTRF permiten un análisis multiparamétrico con la detección de alfa-tubulina en paralelo con la(s) fosfoproteína(s) y/o proteína(s) total(es) en el mismo lisado.
Cómo funciona
Principio del ensayo de mantenimiento de alfa-tubulina
El ensayo de mantenimiento de alfa-tubulina mide la alfa-tubulina endógena en un lisado celular o tisular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo de mantenimiento de alfa-tubulina utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de alfa-tubulina en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína presente en la muestra y permite evaluar cualquier cambio causado por la variabilidad experimental en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas para el mantenimiento de la alfa-tubulina
El ensayo se realiza con un protocolo de dos placas, donde las células se siembran y se tratan en una placa de cultivo. Para la detección, se transfieren 4 µL de lisado a una placa blanca de bajo volumen de 96 o 384 pocillos y se añaden 12 µL de diluyente del kit antes de dispensar 4 µL de reactivos HTRF®. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células en una placa de cultivo celular adecuada. Aplicación: Cuantificación de Proteínas.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Biomarcadores de clase objetivo
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Enfermedades infecciosas cardiovasculares Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis Neurociencia Oncología e inflamación Enfermedades raras
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo