Revvity, 64AURAT2PEH, kit de detección de fosfo-Aurora A humana HTRF (Thr288), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF detecta de forma cómoda y precisa la proteína Aurora A humana (relacionada con el gen AURKA), expresada ubicuamente en eucariotas. Aurora A pertenece a la familia de las serina/treonina quinasas Aurora (incluidas Aurora B y Aurora C), esenciales para la división celular mediante la regulación de la mitosis, especialmente en el proceso de segregación cromosómica. Se activa mediante la autofosforilación del residuo de treonina 288, que ocurre principalmente desde la fase S tardía hasta la fase M durante el ciclo de división celular o la respuesta al daño del ADN. La sobreexpresión de las quinasas Aurora en una amplia gama de cánceres (leucemia, cáncer de colon, cáncer de próstata y cáncer de mama) las convierte en candidatas interesantes para el desarrollo de inhibidores de la quinasa Aurora (AKI).
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-Aurora A(Thr288)
El ensayo Fosfo-Aurora A (Thr288) mide la actividad de Aurora A cuando se fosforila en Thr288. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Fosfo-Aurora A (Thr288) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de Phospho-Aurora A (Thr288)
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-Aurora A (Thr288). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosforo-Aurora A(Thr288)
La detección de Aurora A fosforilada (Thr288) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo