Revvity, 64BDCRBNRED, ligando rojo de talidomida HTRF

Descripción general
El ligando HTRF Thalidomide-Red está destinado principalmente a realizar curvas de unión por afinidad a la proteína Cereblon utilizando tecnología HTRF®.
Cereblon, también conocido como CRBN, participa en numerosos procesos biológicos y está estrechamente relacionado con la proliferación, la apoptosis, el metabolismo celular y la aparición de numerosas enfermedades. Cereblon es también una de las dos ligasas E3 más populares, reclutada por quimeras bifuncionales dirigidas a la proteólisis (PROTAC) para inducir la ubiquitinación y la posterior degradación proteasómica de una proteína diana. Cereblon interactúa con diversas proteínas para formar el complejo funcional de la ubiquitina ligasa E3, en el que CRBN funciona como receptor de sustrato del complejo de la ubiquitina ligasa E3 y dirige las proteínas a la proteólisis.
Los ensayos de unión del ligando HTRF Thalidomide-Red se pueden utilizar junto con el kit de unión HTRF Cereblon (#64BDCRBNPEG/H) para estudios de unión de cooperatividad con el fin de monitorear el efecto del sustrato de proteína PROTAC en el Kd del ligando HTRF Thalidomide-Red para la proteína Cereblon, lo que permite un análisis preciso del efecto cooperativo monitoreado con el kit de unión HTRF Cereblon.
Cómo funciona
Principio del ensayo de unión del ligando rojo de talidomida HTRF en la proteína cereblon
La unión del ligando rojo de talidomida HTRF se detecta mediante un ensayo de unión directa utilizando un anticuerpo anti-GST-Criptato de europio que se une a Cereblon WT humano marcado con GST. Cuando los colorantes están muy próximos, la excitación del donante con una fuente de luz (láser o lámpara de flash) desencadena una Transferencia de Energía por Resonancia de Fluorescencia (FRET) hacia el aceptor, que a su vez fluoresce a una longitud de onda específica (665 nm) (Imagen A). La señal de unión específica se calcula restando la señal de unión no específica de la señal total, lo que permite determinar la Kd del ligando rojo de talidomida HTRF (Imagen B).

Protocolo de ensayo de unión del ligando rojo talidomida HTRF
Los experimentos de unión de saturación del ligando rojo de talidomida HTRF pueden realizarse en placas de 384 pocillos dispensando 5 µL de tampón Diluyente 9 (para unión total) o estándar de unión Cereblon (para unión inespecífica). A continuación, se añaden 5 µL de tampón de unión PROTAC 1 (para referencia) o sustrato de proteína PROTAC diluido en tampón PROTAC 1 (para estudios de cooperatividad), seguido de 5 µL de proteína GST-CRBN. Finalmente, se añaden 5 µL de una solución premezclada de ligando rojo de talidomida HTRF y anticuerpo anti-criptato de Eu-GST. La relación HTRF se mide tras 3 horas de incubación a temperatura ambiente.
La relación HTRF se mide tras 2 horas de incubación a temperatura ambiente. Compatible con automatización: Sí.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos: reactivo fluorescente
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 1 unidad