Revvity, 64BDIAPB3RED, ligando rojo HTRF LCL161

Descripción general
El ligando HTRF LCL161-Red está diseñado principalmente para realizar estudios de unión cooperativa. Permite calcular la afinidad del ligando LCL161 Red por la proteína cIAP1 BIR3 en presencia de la proteína diana de interés. La Kd obtenida del ligando HTRF LCL161-Red por la proteína cIAP1, tanto en ausencia como en presencia de la proteína diana, permite un análisis preciso del efecto cooperativo evaluado con el kit de unión HTRF cIAP1 BIR3.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de unión del ligando HTRF LCL161 en el dominio de unión cIAP1 BIR3
La unión del ligando rojo HTRF LCL161 se detecta mediante un ensayo de unión directa utilizando un anticuerpo anti-GST-Criptato de europio que se une al dominio BIR3 de cIAP1 humano marcado con GST. Cuando los colorantes están muy próximos, la excitación del donante con una fuente de luz (láser o lámpara de flash) desencadena una transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) hacia el aceptor, que a su vez fluoresce a una longitud de onda específica (665 nm) (Imagen A). La señal de unión específica se calcula restando la señal de unión no específica de la señal total, lo que permite determinar la Kd del ligando rojo HTRF LCL161 (Imagen B).

Protocolo de ensayo de unión de ligando rojo HTRF LCL161
Los experimentos de unión de saturación del ligando rojo HTRF LCL161 pueden realizarse en placas de 384 pocillos dispensando 5 µL de tampón Diluyente 9 (para unión total) o del estándar de unión cIAP1 BIR3 (para unión inespecífica). A continuación, se añaden 5 µL de tampón de unión PROTAC 2 (para referencia) o la proteína diluida en tampón de unión PROTAC 2 (para estudios de cooperatividad), seguidos de 5 µL de proteína cIAP BIR3 marcada con GST. Finalmente, se añaden 5 µL de una solución premezclada de ligando rojo HTRF LCL161 y anticuerpo anti-criptato de tuberculosis GST.
La relación HTRF se mide tras 2 horas de incubación a temperatura ambiente. Compatible con automatización: Sí.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos: reactivo fluorescente
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 1 unidad