Revvity, 64BDKEAP1PEG, kit de unión de KEAP1 humano HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La vía KEAP1-NRF2-ARE desempeña un papel importante en la respuesta al estrés oxidativo y en el mantenimiento de la homeostasis redox. KEAP1 (proteína 1 asociada a ECH tipo Kelch) es una subunidad adaptadora de la ubiquitina ligasa E3 basada en Cullin 3, implicada en la respuesta al estrés oxidativo. Al promover la degradación mediada por UPS, KEAP1 controla el nivel de expresión de NRF2, una transcripción clave que regula la expresión de proteínas antioxidantes, asegurando así la protección celular frente al estrés oxidativo. La activación sostenida de NRF2 se ha asociado con la resistencia al cáncer, y se ha demostrado que su inhibición debilita la resistencia a fármacos. La degradación dirigida de proteínas (DPT) utiliza pequeñas moléculas para reclutar ubiquitina ligasas E3 en la proximidad de la proteína diana de interés, promoviendo su degradación dependiente de la ubiquitinación. Se espera que la explotación de los inhibidores de KEAP1 para el desarrollo de quimeras bifuncionales dirigidas a la proteólisis (PROTAC) amplíe la caja de herramientas de las ligasas E3 para la eliminación de proteínas no deseadas (por ejemplo, NRF2) involucradas en diversas enfermedades como cánceres, enfermedades neurodegenerativas y trastornos metabólicos.
Cómo funciona
Principio del ensayo
El kit de unión HTRF de KEAP1 humano es un formato de ensayo competitivo que implementa un ligando KEAP1-Red, un complejo proteico KEAP1 humano marcado con GST y un anticuerpo anti-GST marcado con criptato de terbio. Los compuestos de unión de KEAP1 compiten con el ligando KEAP1-Red y, por lo tanto, impiden la FRET.

Protocolo de ensayo
El ensayo de unión de KEAP1 puede realizarse en placas blancas de bajo volumen de 96 o 384 pocillos (20 µL final). Como se describe aquí, las muestras o los estándares se dispensan directamente en la placa de ensayo. A continuación, se añade el complejo proteico KEAP1 marcado con GST, seguido de la dispensación de los reactivos HTRF: el anticuerpo anti-GST marcado con criptato de terbio y el ligando KEAP1 marcado con un aceptor rojo HTRF. Los reactivos marcados con fluoróforos HTRF pueden premezclarse y añadirse en un solo paso de dispensación. No se requieren lavados. El protocolo puede miniaturizarse o ampliarse aún más simplemente ajustando proporcionalmente el tamaño de cada volumen añadido. Aplicación: Cuantificación de Proteínas.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 5 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Biomarcadores de clase objetivo
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo