Revvity, 64BDMDM2RED, ligando rojo HTRF MI-1061

Descripción general
El ligando TRF MI-1061 Red está destinado principalmente a realizar curvas de unión por afinidad a la proteína MDM2 utilizando tecnología HTRF®.
La MDM2, también conocida como doble minuto murino 2, participa en numerosos procesos biológicos y está estrechamente relacionada con la reparación del ADN, la detención del ciclo celular, la apoptosis y la aparición de numerosas enfermedades. Es una de las ligasas E3 más populares, reclutada por quimeras bifuncionales dirigidas a la proteólisis (PROTAC) para inducir la ubiquitinación y la posterior degradación proteasómica de una proteína diana. La MDM2 interactúa con diversas proteínas para formar el complejo funcional de la ubiquitina ligasa E3, en el que actúa como receptor de sustrato del complejo y se dirige a diversas proteínas como proteína diana para la proteólisis.
Por lo tanto, la identificación de nuevos ligandos MDM2 es una forma de controlar los procesos biológicos implicados en enfermedades oncológicas, neurodegenerativas o metabólicas mediante la inducción de la degradación dependiente del proteasoma de proteínas como p53.
Los ensayos de unión del ligando HTRF MI-1061 Red se pueden utilizar junto con el kit de unión HTRF MDM2 (#64BDMDM2PEG/H) para estudios de unión de cooperatividad para monitorear el efecto del sustrato de proteína PROTAC en el Kd del ligando HTRF MI-1061 Red para la proteína MDM2, lo que permite un análisis preciso del efecto cooperativo monitoreado con el kit de unión HTRF MDM2.
Cómo funciona
Principio del ensayo de unión del ligando HTRF MI-1061 en la proteína MDM2
La unión del ligando rojo HTRF MI-1061 se detecta mediante un ensayo de unión directa con un anticuerpo anti-GST-Criptato de europio que se une al MDM2 humano marcado con GST. Cuando los colorantes están muy próximos, la excitación del donante con una fuente de luz (láser o lámpara de flash) desencadena una transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) hacia el aceptor, que a su vez fluoresce a una longitud de onda específica (665 nm) (Imagen A). La señal de unión específica se calcula restando la señal de unión no específica de la señal total, lo que permite determinar la Kd del ligando rojo HTRF MI-1061 (Imagen B).

Protocolo de ensayo de unión del ligando rojo HTRF MI-1061
Los experimentos de unión de saturación del ligando rojo HTRF MI-1061 pueden realizarse en placas de 384 pocillos dispensando 5 µL de tampón Diluyente 9 (para unión total) o el estándar MDM2 (para unión inespecífica). A continuación, se añaden 5 µL de tampón de unión PROTAC 3 (para referencia) o sustrato de proteína PROTAC diluido en tampón de unión PROTAC 3 (para estudios de cooperatividad), seguido de 5 µL de proteína MDM2 marcada con GST. Finalmente, se añaden 5 µL de una solución premezclada de ligando rojo HTRF MI-1061 y anticuerpo anti-criptato Eu de GST.
La relación HTRF se mide tras una hora de incubación a temperatura ambiente. Compatible con automatización: Sí.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos: reactivo fluorescente
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 1 unidad