Revvity, 64BRD4TPEG, kit de detección de BRD4 total en humanos y ratones HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
BRD4 es un regulador transcripcional que participa en la embriogénesis y el desarrollo del cáncer. Al igual que los demás miembros de la familia de bromodominios y extraterminales (BET) (BRD2, BRD3 y BRDT), BRD4 comprende dos bromodominios que se unen a residuos de lisina acetilada en proteínas, como las histonas. Asociadas con la ciclina T1 y CDK9, las tres proteínas forman un complejo multiproteico llamado P-TEFb y controlan la transcripción génica. Además de su función en el control transcripcional, BRD4 participa en la respuesta al daño del ADN.
La inhibición de la función de BRD4 forma parte de la estrategia para el tratamiento del cáncer. Más recientemente, la inhibición de la degradación de BRD4 mediante moléculas PROTAC se ha convertido en un enfoque terapéutico novedoso y prometedor.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-BRD4
El ensayo HTRF Total-BRD4 cuantifica el nivel de expresión de BRD4 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-BRD4 utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de BRD4 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de Total-BRD4
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-BRD4 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para Total-BRD4
La detección de Total-BRD4 con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo