Revvity, 64C1QPET, kit de unión de C1q humano HTRF, 100 puntos de ensayo

Descripción general
La citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) es una importante función efectora de los anticuerpos. La activación de la vía clásica del complemento se inicia mediante la unión de la proteína del complemento C1q a la región Fc de las inmunoglobulinas unidas a un antígeno diana de la superficie celular. Esta interacción desencadena la activación enzimática secuencial de las proteínas del complemento circulantes y, finalmente, conduce a la formación del complejo de ataque a la membrana (MAC), que media la lisis de la célula diana.
La capacidad de unión de C1q y la actividad CDC resultante pueden influir en la seguridad y eficacia de los anticuerpos monoclonales terapéuticos, por lo que requieren caracterización durante el proceso de desarrollo. La ingeniería de la región Fc de los anticuerpos IgG (p. ej., mediante mutaciones o glicoingeniería) es actualmente un área de investigación activa para mejorar o reducir la capacidad de los productos biológicos para reclutar complemento.
El kit de unión de C1q humano mide la unión de la región Fc de los anticuerpos IgG agregados a C1q humano en solución.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de unión de C1q humano HTRF
El ensayo HTRF de unión a C1q humano mide la unión de la región Fc de los anticuerpos IgG a C1q humano en solución tamponada. A diferencia de los métodos convencionales, que requieren la inmovilización de anticuerpos en fase sólida, este ensayo permite una caracterización sencilla y rápida de anticuerpos en un formato genérico homogéneo. Se utiliza un anticuerpo Fab anti-IgG humana biotinilado, complejo con estreptavidina, para capturar y agregar el anticuerpo analizado en solución. Los anticuerpos unidos a C1q humano se detectan en un formato de ensayo sándwich utilizando un anticuerpo anti-C1q marcado con criptato Eu3+ (donante) y la estreptavidina marcada con d2 (aceptor). La interacción entre ambos fluoróforos acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la capacidad de la región Fc del anticuerpo para interactuar con C1q humano.

Protocolo de ensayo de unión de C1q humano HTRF
El ensayo de unión de C1q humano puede realizarse en una placa blanca de bajo volumen de 96 o 384 pocillos (20 µL final). Requiere solo un paso de incubación tras la adición secuencial de los reactivos. Como se describe aquí, los anticuerpos analizados (o el estándar) se dispensan directamente en la placa. A continuación, se añade la premezcla [Anti-IgG humana-Fab-biotina + Estreptavidina-d2], seguida de la dispensación de la proteína C1q humana y el anticuerpo anti-C1q marcado con Eu3+ Criptato. Tras una incubación de 3 h a temperatura ambiente, la señal de FRET puede registrarse en un lector compatible con HTRF. No se requieren lavados. El protocolo puede miniaturizarse o ampliarse aún más simplemente ajustando proporcionalmente el tamaño de cada volumen añadido. Interacción entre aplicaciones y proteínas.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 5 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Ensayo de unión de clase objetivo
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología de la inflamación e inflamación
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo