Revvity, 64CDK2Y15PEG, kit de detección de fosfo-CDK2 (Tyr15) humana y de ratón HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células HTRF detecta de forma cómoda y precisa el CDK2 fosforilado en Tyr15. ​​​​​​​
La CDK2 (quinasa dependiente de ciclina 2) pertenece a la subfamilia de las CDK que coordinan la progresión del ciclo celular en células de mamíferos (incluidas también CDK1, CDK4 y CDK6). La CDK2 se activa mediante la interacción con la ciclina E y la ciclina A durante la fase G1 tardía y la fase S, respectivamente, y también está regulada por dos sitios de fosforilación principales. La fosforilación en Tyr15 por la quinasa Wee1 es inhibitoria al impedir la unión de ATP, mientras que la desfosforilación de Tyr15 por la fosfatasa Cdc25A y la fosforilación en Thr160 por la CAK (quinasa activadora de CDK) son necesarias para su actividad completa.
La fosforilación inhibidora de CDK2 en Tyr15 es esencial para mantener la integridad del genoma y prevenir el daño al ADN durante la fase S. Por lo tanto, el eje Wee1/Cdc25A es una diana atractiva para la terapia contra el cáncer y podría representar un enfoque único para sensibilizar las células cancerosas con CDK2 hiperactiva.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-CDK2 (Tyr15)
El ensayo Phospho-CDK2 (Tyr15) mide la presencia de CDK2 fosforilada en Tyr15. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-CDK2 (Tyr15)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfo-CDK2 (Tyr15). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-CDK2 (Tyr15)
La detección de CDK2 fosforilada (Tyr15) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo