Revvity, 64CDK6TPEG, kit de detección de CDK6 total humano HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular Total CDK6 monitorea los niveles de proteína CDK6.
La CDK6 (quinasa dependiente de ciclina 6) pertenece a la subfamilia de las CDK que coordinan la progresión del ciclo celular en células de mamíferos (también incluye CDK1, CDK2 y CDK4). En la fase G1 temprana del ciclo celular, la CDK6 se activa por interacción con la ciclina D y monofosforila el supresor tumoral RB (proteína del retinoblastoma), lo que conduce a la transcripción de genes necesarios para la transición de la fase G1 a la fase S.
La activación desregulada de CDK6, que conduce a una división celular descontrolada, es un rasgo distintivo del cáncer. Por lo tanto, la inhibición de CDK6 es un área de investigación activa, especialmente desde la aparición de nuevos enfoques que utilizan PROTAC (quimeras dirigidas a la proteólisis).
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de CDK6 total
El ensayo de CDK6 Total cuantifica el nivel de expresión de CDK6 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo de CDK6 Total utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de CDK6 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de CDK6 total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección de CDK6 HTRF total. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para CDK6 total
La detección de CDK6 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo