Revvity, 64CHK2T8PEH, kit de detección de fosfo-CHK-2 humana (Thr68) HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células HTRF permite la detección cuantitativa y rápida de CHK2 fosforilada en la treonina 68, como una lectura de la vía de señalización ATM/CHK2 tras una respuesta al daño del ADN (DDR).
En respuesta al daño del ADN, como las roturas de doble cadena (DSB), se activan las respuestas de los puntos de control de replicación y de la vía ATM-Chk2 que median los puntos de control G1/S para detener la progresión del ciclo celular y permitir tiempo adicional para la reparación del ADN.
La activación de ATM provoca la fosforilación de la quinasa de punto de control Chk2 en la treonina 68. Chk2 es una proteína estable que se expresa a lo largo del ciclo celular y parece permanecer prácticamente inactiva en ausencia de daño al ADN. La activación de CHK2 implica su dimerización y autofosforilación, e induce la activación de los efectores de señal posteriores, como la proteína supresora de tumores p53 y CdC25C, y también controla la actividad de cdk2/ciclina A.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF Phospho CHK2 Thr68
El ensayo Fosfo-CHK2 (Thr68) mide la fosforilación de CHK2 en Thr68. A diferencia del Western Blot, este ensayo se realiza completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia.
El ensayo Phospho-CHK2 (Thr68) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo entre los dos anticuerpos marcados, que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de Phospho Thr68-CHK2
El protocolo de 2 placas implica cultivar células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y luego transferir lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de agregar los reactivos de detección HTRF Phospho-CHK2 (Thr68).
Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de Phospho-Thr68-CHK2
La detección de CHK2 fosforilada (Thr68) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado.
Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo