Revvity, 64CRAFS43V2PEG, kit de detección de HTRF Phospho-c-RAF (Ser43), 500 puntos de ensayo

Descripción general
El kit de ensayo celular Phospho-c-RAF o Raf-1 (Ser43) está diseñado para la cuantificación robusta de cRaf fosforilada en Ser-43 directamente mediante un protocolo optimizado de mezcla y lectura, sin lavado. cRaf desempeña un papel fundamental en la proliferación y diferenciación celular. Este kit puede utilizarse desde la investigación básica hasta el cribado de fármacos de alto rendimiento. Su versatilidad lo hace adecuado para diversas aplicaciones, desde la investigación básica hasta el análisis de cuestiones farmacológicas en modelos celulares, y tiene aplicaciones en la investigación oncológica y de enfermedades infecciosas.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-cRAF (Ser43)
El ensayo Phospho-cRAF (Ser43) mide la fosforilación de cRAF en Ser43. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-cRAF (Ser43)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-cRAF (Ser43). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-cRAF (Ser43)
La detección de cRAF fosforilado (Ser43) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, facilita la miniaturización manteniendo la calidad HTRF. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Tampón/Tampón de lisis de disolvente 2
Modalidad de detección-HTRF
Especie huésped: humana
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-cRAF
Clase objetivo: fosfoproteínas
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología de la inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo