Revvity, 64CRBNPEH, kit de detección de cerebelones totales humanos y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular Total Cereblon mide el nivel de expresión de la ligasa de ubiquitina E3 Cereblon (CRBN) en las células.
Cereblon es una proteína expresada de forma ubicua que funciona como una subunidad de reconocimiento de sustrato dentro del complejo ubiquitina ligasa E3 CRL4-CRBN y se dirige a proteínas específicas para la proteólisis a través del Sistema Ubiquitina Proteasoma (UPS).
El cerebelo desempeña un papel clave en el crecimiento normal de las extremidades, la proliferación y el metabolismo celular normales, y en la memoria y el aprendizaje.
Cereblon también es el principal objetivo directo de los fármacos inmunomoduladores (IMiD) talidomida, pomalidomida y lenalidomida, todos ellos aprobados por la FDA para el tratamiento del mieloma múltiple. Curiosamente, los IMiD se han derivado recientemente en moléculas PROTAC para dirigir la degradación de proteínas no deseadas por el UPS.
Cómo funciona
Principio del ensayo de Cereblon total
El ensayo Total Cereblon cuantifica el nivel de expresión de Cereblon en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total Cereblon utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de Cereblon en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de Cereblon total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total Cereblon HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de Cereblon total
La detección de Cereblon Total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo