Revvity, 64CYCD1T6PEH, kit de detección de fosfociclina D1 humana HTRF (Thr286), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células HTRF detecta de forma cómoda y precisa la ciclina D1 fosforilada en Thr286. ​​​​​​​
Los miembros de la familia de la ciclina D (incluidas las ciclinas D1, D2 y D3) son importantes reguladores de la progresión del ciclo celular. Son mediadores integrales de la progresión de la fase G1 a la fase S dependiente del factor de crecimiento, actuando como reguladores alostéricos de CDK4/6.
La ciclina D1 se regula positivamente en presencia de estímulos mitogénicos extracelulares y luego se regula negativamente rápidamente por la degradación proteasomal tras su fosforilación en Thr286 por la quinasa GSK-3β.
La ciclina D1 es un oncogén cuya sobreexpresión provoca una actividad desregulada de CDK4/6 y conduce a la tumorigénesis. La sobreexpresión de ciclina D1 puede deberse a la amplificación génica o a reordenamientos cromosómicos, o a una degradación deficiente de la proteína. Se han descrito mutaciones y deleciones que afectan su fosforilación en Thr286 en varios cánceres humanos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfociclina D1 (Thr286)
El ensayo de Fosfociclina D1 (Thr286) mide la ciclina D1 cuando se fosforila en Thr286. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo de Fosfociclina D1 (Thr286) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfociclina D1 (Thr286)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfociclina D1 (Thr286). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfociclina D1 (Thr286)
La detección de la ciclina D1 fosforilada (Thr 286) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo