Revvity, 64DAP12TPEH, kit de detección de DAP12 total humana HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular Total DAP12 monitoriza los niveles de proteína DAP12 total y puede utilizarse como ensayo de normalización junto con nuestro kit Phospho-DAP12 (Tyr91). Este kit está diseñado para ser compatible con los tampones del kit Phospho-DAP12, lo que permite utilizar el mismo lisado para analizar tanto las poblaciones de proteína fosforilada como la total. DAP12 (proteína de activación DNAX 12), también conocida como TYROBP (proteína de unión a la proteína tirosina quinasa TYRO), es una proteína adaptadora de señalización transmembrana que desempeña un papel crucial en la respuesta inmunitaria innata y la neuroinflamación. DAP12 se expresa ampliamente en diversas células inmunitarias, como las células asesinas naturales, los monocitos, los macrófagos y la microglía, las células inmunitarias residentes del sistema nervioso central.
El eje de señalización DAP12-TREM2 es particularmente importante en el contexto de la neuroinflamación y las enfermedades neurodegenerativas. Regula la activación y la función microglial, influyendo en la respuesta inmunitaria y la homeostasis cerebral. Se han identificado variantes genéticas de TREM2 como factores de riesgo para la enfermedad de Alzheimer, lo que destaca la importancia de esta vía para el mantenimiento de la salud cerebral. La monitorización de los niveles totales de DAP12 junto con su forma fosforilada proporciona información valiosa sobre la expresión general y el estado de activación de esta proteína de señalización crucial.
Cómo funciona
Principio del ensayo Total DAP12
El ensayo Total DAP12 cuantifica el nivel de expresión de DAP12 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total DAP12 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de DAP12, esto permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET.
Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína total presente en la muestra y proporciona un medio para evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de DAP12 total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total DAP12. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de DAP12 total
La detección de DAP12 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-DAP12
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Sistema nervioso central
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo