Revvity, 64DAP12Y1PEH, kit de detección de fosfo-DAP12 (Tyr91) humana HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF proporciona un método práctico y preciso para detectar la DAP12 fosforilada en Tyr91. La DAP12 (proteína de activación DNAX 12), también conocida como TYROBP (proteína de unión a la proteína tirosina quinasa TYRO), es una proteína adaptadora de señalización transmembrana que desempeña un papel crucial en las respuestas inmunitarias innatas y la neuroinflamación. La DAP12 se expresa ampliamente en diversas células inmunitarias, como las células asesinas naturales (NK), los monocitos, los macrófagos y la microglía, las células inmunitarias residentes del sistema nervioso central. En el contexto de la neuroinflamación, la DAP12 es particularmente importante debido a su asociación con el receptor TREM2 (receptor desencadenante expresado en células mieloides 2). El eje de señalización DAP12-TREM2 es un regulador clave de la función microglial, que influye en procesos como la fagocitosis, las respuestas inflamatorias y el metabolismo lipídico. Al permitir la detección de DAP12 fosforilado en Tyr91, este ensayo proporciona a los investigadores una herramienta valiosa para investigar la activación microglial, los procesos neuroinflamatorios y los efectos potenciales de las intervenciones terapéuticas dirigidas a la vía DAP12-TREM2.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-DAP12 (Tyr91)
El ensayo Phospho-DAP12 (Tyr91) mide la DAP12 cuando se fosforila en Tyr91. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación.
La fosforilación de proteínas permite la formación de un complejo inmune que involucra ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal FRET.
Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y proporciona un medio para evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-DAP12 (Tyr91)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-DAP12 (Tyr91). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-DAP12 (Tyr91)
La detección de DAP12 fosforilada (Tyr91) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-DAP12
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Sistema nervioso central
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo