Revvity, 64DDR1Y13PEH, kit de detección de fosfo-DDR1 humana HTRF (Tyr513), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El DDR (miembro 1 de la familia del receptor del dominio de discoidina) es un receptor transmembrana de tirosina quinasa presente en células epiteliales y mesenquimales. Se une al colágeno y es activado por él, y es clave en la interacción célula-matriz, participando en la adhesión y la migración. Estas funciones lo convierten en una posible diana de interés en trastornos relacionados con la matriz, como la fibrosis, pero también en algunos tipos de cáncer donde la migración e invasión celular son cruciales.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-DDR1 (Tyr513)

El ensayo Phospho-DDR1 (Tyr513) mide la DDR1 cuando se fosforila en Tyr513. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-DDR1 (Tyr513)

El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfo-DDR1 (Tyr513). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-DDR1 (Tyr513)

La detección de DDR1 fosforilada (Tyr513) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo