Revvity, 64ENOSTPEH, kit de detección de eNOS total humana HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular de eNOS total monitoriza la eNOS total y puede utilizarse como ensayo de normalización con nuestro kit de fosfo-eNOS (S1177). Este kit es compatible con los tampones del kit de fosfo-eNOS, por lo que el mismo lisado puede utilizarse para analizar tanto las poblaciones de proteínas fosforiladas como las totales.
La eNOS se expresa principalmente en las células endoteliales, donde su función es controlar la dilatación de los vasos sanguíneos, la presión arterial y numerosos otros efectos antiateroscleróticos y vasoprotectores.
La serina 1177 es el sitio de fosforilación más importante de la eNOS, modulando positivamente su actividad. La fosforilación en la serina 1177 está controlada por varias quinasas, como AKT, PKA, AMPK, CaMKK2b y CHKI.
Cómo funciona
Principio del ensayo de eNOS total
El ensayo de eNOS total cuantifica el nivel de expresión de eNOS en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo de eNOS total utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de eNOS en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de eNOS total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total eNOS HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de eNOS total
La detección de eNOS total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Metabolismo cardiovascular/Diabetes
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo