Revvity, 64ERKPEH, kit de detección de fosfo-ERK (Thr202/Tyr204) humana y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Los kits de ensayo Phospho-ERK están diseñados para la cuantificación robusta de la modulación de ERK, fosforilada en Thr202/Tyr204, para el cribado dirigido a GPCR y RTK como lectura de la vía MAPK. El sencillo protocolo de mezcla y lectura elimina todos los pasos de lavado para un análisis más rápido y resultados de alta calidad.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-ERK (Thr202/Tyr204)
El ensayo Phospho-ERK (Thr202/Tyr204) mide la fosforilación de ERK en Thr202/Tyr204. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-ERK (Thr202/Tyr204) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de las proteínas en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de fosfo-ERK
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis. Posteriormente, se transfieren los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho-ERK HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-ERK
La detección de ERK fosforilada con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío a temperatura ambiente
Objetivo-ERK1/2
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: Metabolismo/Diabetes, EHNA/Fibrosis, Neurociencia, Oncología e Inflamación, Enfermedades raras
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo