Revvity, 64FAKPEH, kit de detección de fosfo-FAK (Tyr397) humana y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF cuantifica de forma práctica y precisa la FAK fosforilada en Tyr397 (residuo para humanos, ratas y pollos, equivalente a Y428 para ratones). La FAK, o quinasa de adhesión focal, es una tirosina quinasa citoplasmática que controla la adhesión, migración, proliferación y supervivencia celular. La FAK es un regulador central de la señalización de la matriz extracelular (ECM)/integrina y cadherina, y desempeña un papel en la adhesión celular, la unión celular, la migración, la supervivencia y la mecanodetección. La FAK puede ser activada por receptores de factores de crecimiento, receptores de citocinas y GPCR. El aumento de la expresión y la fosforilación de la FAK se asocia con un aumento de la adhesión, migración e invasión de células tumorales en varios tipos de cáncer, y con la migración de fibroblastos sobre fibronectina en la fibrosis tisular.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-FAK (Tyr397)
El ensayo Phospho-FAK (Tyr397) mide la FAK (quinasa de adhesión focal) cuando se fosforila en Tyr397. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-FAK (Tyr397) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-FAK (Tyr397)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-FAK (Tyr397). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-FAK (Tyr397)
La detección de FAK fosforilada (Tyr397) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 2, tampón de lisis 3
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología cardiovascular, esteatohepatitis no alcohólica (NASH)/fibrosis e inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo