Revvity, 64FLT3TPEH, kit de detección de FLT3 total humano HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo de detección HTRF Human FLT3 (tirosina quinasa 3 similar a Fms), también denominado FLK2, monitoriza el FLT3 de tipo silvestre (FLT3 WT) y/o el mutante FLT3 con duplicación interna en tándem (ITD), y se utiliza para detectar la expresión de FLT3 endógeno o sobreexpresado en diversas células. FLT3 es un receptor de tirosina quinasa de clase III que se expresa en células inmunitarias y se activa por su ligando, FLT3L. Tras la unión de FLT3L, el receptor FLT3 dimeriza y activa diversas vías, como la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) y las vías MAPK, lo que provoca la división celular, la proliferación y la supervivencia de las células inmunitarias. Una desregulación de las vías FLT3 podría provocar proliferación anárquica, células inmunitarias inmaduras y fenotipos oncogénicos. El gen FLT3 es el que presenta mutaciones más frecuentes en la leucemia mieloide aguda (LMA). Las mutaciones en el gen FLT3 provocan la activación constitutiva de la actividad de la quinasa del receptor o interrumpen su actividad autoinhibitoria. El mutante ITD de FLT3 es bien conocido por su implicación en la LMA. Por lo tanto, los mutantes de FLT3 se han convertido en importantes dianas farmacológicas para la industria farmacéutica. El desarrollo de compuestos PROTAC para combatir la degradación de FLT3 forma parte de la estrategia terapéutica para combatir formas de leucemia como la LMA.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF Human Total FLT3
El ensayo HTRF Human Total FLT3 cuantifica el nivel de expresión de FLT3 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Human Total FLT3 utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de FLT3 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas para FLT3 total humano
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Human Total FLT3 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para FLT3 total humano
La detección de FLT3 humano con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo