Revvity, 64FLT3Y1PEH, kit de detección de fosfo-FLT3 humano HTRF (Tyr589/591), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo de detección HTRF Phospho Tyr 589/591 Human FLT3 (tirosina quinasa 3 similar a Fms), también llamado FLK2, monitorea la fosforilación de FLT3 de tipo silvestre (FLT3 WT) y/o mutante de duplicación interna en tándem (ITD) FLT3 en Tyr 589/591 en varias células. FLT3 es un receptor de tirosina quinasa de clase III expresado en células inmunitarias y activado por su ligando, FLT3L. Después de la unión de FLT3L, el receptor FLT3 dimeriza y activa una variedad de vías, incluyendo la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) y las vías MAPK que resultan en la división celular, proliferación y supervivencia de las células inmunitarias. Una desregulación de las vías FLT3 podría conducir a la proliferación anárquica, células inmunitarias inmaduras y fenotipos oncogénicos. El FLT3 es el gen con mayor frecuencia de mutación en la leucemia mieloide aguda (LMA). Las mutaciones en el gen FLT3 provocan la activación constitutiva de la actividad de la quinasa del receptor o interrumpen su actividad autoinhibitoria. El mutante ITD del FLT3 es bien conocido por su implicación en la LMA. Por lo tanto, los mutantes del FLT3 se han convertido en importantes dianas farmacológicas para la industria farmacéutica.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-FLT3 (Tyr 589/591)
El ensayo Phospho-FLT3 (Tyr 589/591) mide FLT3 cuando se fosforila en las tirosinas 589 y 591. A diferencia del Western Blot, el ensayo se basa completamente en placas y no requiere geles, electroforesis ni transferencia.
El ensayo Phospho-FLT3 (Tyr 589/591) utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo entre los dos anticuerpos marcados, que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-FLT3 (Tyr 589/591)
El protocolo de dos placas implica cultivar células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y luego transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de la adición de los reactivos de detección HTRF Phospho-FLT3 Tyr589/591.
Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para fosfo-FLT3 (Tyr 589/591)
La detección de Phospho-FLT3 Tyr589/591 con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado.
Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo