Revvity, 64GAPDHPEG, kit de limpieza de GAPDH humano y de ratón HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo está diseñado para medir el nivel de expresión endógena de GAPDH en células y tejidos, con el fin de normalizar los datos obtenidos sobre la(s) fosfoproteína(s) y/o proteína(s) total(es) de interés. La gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) es una enzima glucolítica clave que se expresa de forma constitutiva y estable en todas las células y tejidos. Su secuencia de aminoácidos presenta un alto grado de homología entre especies de mamíferos. Estas características la convierten en una de las proteínas de mantenimiento más utilizadas. Su concentración es proporcional al número de células y a la concentración total de proteína, por lo que se utiliza como control interno para la normalización de datos y para corregir los cambios de señal causados ​​por la variabilidad experimental (p. ej., el número de células restantes en la placa de cultivo tras el tratamiento o la eficacia de la lisis). El bajo volumen de muestra de 4 µL y su compatibilidad con todos los tampones de lisis de proteínas fosfo-totales HTRF permiten un análisis multiparamétrico del mismo lisado, con la detección de GAPDH en paralelo con las proteínas fosfo- y/o totales de interés.
Cómo funciona
Principio del ensayo de mantenimiento GAPDH
El ensayo de mantenimiento de GAPDH mide la GAPDH endógena en un lisado celular o tisular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo de mantenimiento de GAPDH utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de GAPDH en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína presente en la muestra y permite evaluar cualquier cambio causado por la variabilidad experimental en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de mantenimiento de GAPDH
El ensayo se realiza con un protocolo de dos placas, donde las células se siembran y se tratan en una placa de cultivo. Para la detección, se transfieren 4 µL de lisado a una placa blanca de bajo volumen de 96 o 384 pocillos y se añaden 12 µL de diluyente del kit antes de dispensar 4 µL de reactivos HTRF®. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células en una placa de cultivo celular adecuada. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo