Revvity, 64GTAPEH, kit de detección de GSK3α total en humanos y ratones HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular Total GSK3a se utiliza como ensayo de normalización con el kit fosfo-GSK3a. Es óptimo para la investigación metabólica. GSK3 participa en la señalización de PI3K/AKT, Wnt/ß-catenina, Hedgehog, Notch, la síntesis de glucógeno y la polimerización del citoesqueleto, que controlan la síntesis de proteínas, la proliferación celular, la migración, la inflamación, la respuesta inmunitaria, la regulación de la glucosa y la apoptosis.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de GSK3a total
El ensayo Total-GSK3a cuantifica el nivel de expresión de GSK3a en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-GSK3a utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de GSK3a en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de Total-GSK3a
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis. Posteriormente, se transfieren los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total-GSK3a. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de GSK3a total
La detección de GSK3a total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Enfermedades infecciosas Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo