Revvity, 64H2AXTPEH, kit de detección de H2AX total humano HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El kit Total-H2AX ofrece la detección cuantitativa de la variante de histona humana H2AX. La fosforilación específica de H2AX en Ser139 puede ocurrir cuando se rompe el ADN bicatenario, ya sea por radiación ionizante o por procesos fisiológicos endógenos. Esta modificación, denominada gamma-H2AX (fosfo-Ser139), desencadena la detención del ciclo celular y la reparación del ADN en respuesta al daño, lo que hace que este ensayo sea especialmente apropiado para estudiar la estabilidad genómica, el ciclo celular, la reparación del ADN y, en general, como biomarcador para el cáncer y para la investigación del envejecimiento.
Cómo funciona
Principio del ensayo de H2AX total
El ensayo Total-H2AX cuantifica el nivel de expresión de H2AX en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-H2AX utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de H2AX en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de Total-H2AX
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total H2AX HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de H2AX total
La detección de H2AX total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo