Revvity, 64HDAC4S6PEH, kit de detección de fosfo-HDAC4 (Ser246) humana y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Las histonas desacetilasas (HDAC) regulan la remodelación de la cromatina y la subsiguiente transcripción génica controlando el estado de acetilación de las histonas. La desacetilación de las histonas induce una conformación condensada de la cromatina, lo que contribuye a la represión de la transcripción génica, la cual participa en diversos procesos fisiológicos.
Es importante destacar que las HDAC presentan una desregulación en diversos trastornos cerebrales. Esto está implicado en la patogénesis de estas enfermedades, como el autismo, la enfermedad de Alzheimer y los trastornos depresivos. Esto sugiere que las HDAC podrían ser dianas potenciales para el tratamiento de trastornos cerebrales.
Entre las HDAC de clase II, la HDAC4 es una diana específica para el tratamiento del ictus isquémico. Desempeña un papel clave en la patogénesis del ictus isquémico y también en la recuperación postictus, al afectar la muerte neuronal, la angiogénesis y la neurogénesis.
Las vías epigenéticas definen subgrupos biológicamente relevantes de cánceres humanos. La activación de EZH2 y la activación de HDAC4 se correlacionan con la señalización de factores de crecimiento y la inflamación, respectivamente, y representan dos estados distintos para las células cancerosas. Este conocimiento podría permitirnos identificar factores desencadenantes diana en el cáncer de mama y el glioblastoma mesenquimal.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-HDAC4 (Ser246)
El ensayo Fosfo-HDAC4 (Ser246) mide la fosforilación de HDAC4 en Ser246. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Fosfo-HDAC4 (Ser246) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de fosfo-HDAC4 (Ser246)
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfo-HDAC4 (Ser246). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de fosfo-HDAC4 (Ser246) en una placa
La detección de HDAC4(Ser246) fosforilada con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 2, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo