Revvity, 64HSP70TPEG, kit de detección de HSP70-1A/1B total en humanos y ratones HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
HSP70-1A y HSP70-1B, también conocidas como HSPA1A y HSPA1B, son las principales proteínas de choque térmico de 70 kDa inducibles por estrés. Estas chaperonas moleculares altamente conservadas desempeñan un papel crucial en el mantenimiento del control de calidad de las proteínas y la homeostasis celular en condiciones de estrés como el choque térmico, el estrés oxidativo, la exposición a metales pesados ​​o fármacos proteotóxicos.
Las HSP70-1A/1B también son potentes proteínas antiapoptóticas, lo que las hace esenciales para el crecimiento y la supervivencia de las células cancerosas. Se observan niveles elevados de expresión de estas proteínas en diversos tipos de cáncer y se asocian con mal pronóstico, recurrencia y resistencia al tratamiento. Por consiguiente, la focalización de la HSP70-1A/1B representa una estrategia prometedora para sensibilizar los tumores a la terapia.
Por el contrario, se ha demostrado que la HSP70-1A/1B protege al cerebro de diversas lesiones del sistema nervioso al inhibir tanto la muerte celular como la respuesta inmunitaria. Por ello, se están explorando compuestos farmacéuticos capaces de inducir la expresión de la HSP70 como posibles tratamientos para enfermedades neurológicas.
Cómo funciona
Principio del ensayo Total HSP70-1A/1B
El ensayo Total HSP70-1A/1B mide los niveles de HSP70-1A/1B en células. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia de proteínas. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para distintos epítopos de la proteína diana.
En presencia de HSP70-1A/1B, se forma un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, acercando el fluoróforo donante al aceptor. Esta interacción genera una señal de FRET, cuya intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína total en la muestra. El ensayo también permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína, todo ello en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de HSP70-1A/1B total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total HSP70-1A/1B. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para HSP70-1A/1B total
La detección de HSP70-1A/1B total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-HSP70 1A/1B
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica-Oncología del Sistema Nervioso Central
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo