Revvity, 64HSPS78PEH, kit de detección de HTRF fosfo-HSP27 (Ser78), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína de choque térmico (HSP) 27 (también conocida como HSPB1) es una chaperona pequeña (aproximadamente 27 kD) e independiente de ATP. La HSP27 se encuentra en niveles basales en células y tejidos y se organiza en grandes oligómeros de hasta 1000 kD. Tras la fosforilación (Ser-15, Ser-78, Ser-82, Thr-143), la HSP27 se reorganiza en oligómeros más pequeños, a menudo dímeros y tetrámeros, y puede interactuar con otras proteínas. Este simple cambio en el estado de fosforilación regula muchas de las funciones canónicas de la HSP27. Se ha informado que la HSP27 participa en la resistencia celular al choque térmico y a varios factores de estrés, como la hipoxia, el estrés oxidativo, las infecciones y la radiación ultravioleta. Sin embargo, la función de la HSP27 se ve alterada durante la enfermedad, y la HSP27 contribuye a promover la enfermedad, en lugar de regular adecuadamente la homeostasis celular. Por lo tanto, HSP27 se sobreexpresa en varias líneas de células cancerosas y la progresión del tumor, el potencial metastásico y la resistencia al tratamiento se han atribuido al aumento de la expresión de HSP27 o la fosforilación de HSP27, lo que convierte a HSP27 en un objetivo terapéutico de interés.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-HSP27 (Ser78)
El ensayo Fosfo-HSP27 (Ser78) mide la HSP27 cuando se fosforila en Ser78. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-HSP27 (Ser78)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfo-HSP27 (Ser78). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-HSP27 (Ser78)
La detección de HSP fosforilada (Ser78) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, facilita la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Tampón/Tampón de lisis por disolvente 1
Modalidad de detección-HTRF
Especie huésped: humana
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-HSP27
Clase objetivo: fosfoproteínas
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología de la inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo