Revvity, 64HSPTPEG, kit de detección de HSP27 total humana HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína de choque térmico (HSP) 27 (también conocida como HSPB1) es una chaperona pequeña (aproximadamente 27 kD) e independiente de ATP. La HSP27 se encuentra en niveles basales en células y tejidos y se organiza en grandes oligómeros de hasta 1000 kD. Tras la fosforilación (Ser-15, Ser-78, Ser-82, Thr-143), la HSP27 se reorganiza en oligómeros más pequeños, a menudo dímeros y tetrámeros, y puede interactuar con otras proteínas. Este simple cambio en el estado de fosforilación regula muchas de las funciones canónicas de la HSP27. Se ha informado que la HSP27 participa en la resistencia celular al choque térmico y a varios factores de estrés, como la hipoxia, el estrés oxidativo, las infecciones y la radiación ultravioleta. Sin embargo, la función de la HSP27 se ve alterada durante la enfermedad, y la HSP27 contribuye a promover la enfermedad, en lugar de regular adecuadamente la homeostasis celular. Por lo tanto, HSP27 se sobreexpresa en varias líneas de células cancerosas y la progresión del tumor, el potencial metastásico y la resistencia al tratamiento se han atribuido al aumento de la expresión de HSP27 o la fosforilación de HSP27, lo que convierte a HSP27 en un objetivo terapéutico de interés.
Cómo funciona
Principio del ensayo de HSP27 total
El ensayo Total HSP27 cuantifica el nivel de expresión de HSP27 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total HSP27 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de HSP27 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de HSP27 total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total HSP27. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para HSP27 total
La detección de HSP27 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, facilita la miniaturización, manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Tampón/Tampón de lisis por disolvente 1
Modalidad de detección-HTRF
Especie huésped: humana
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-HSP27
Clase objetivo: fosfoproteínas
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología de la inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo